人神经内分泌分化的结肠癌上皮细胞

人神经内分泌分化的结肠癌上皮细胞
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基(RPIVM-1640:GIBCO,添加NaHC031.5g八, D-葡萄糖【táng】2.5g八，丙酮酸【suān】钠O.llg八【bā】，0.01mg/ml牛胰岛素，10|ag/mL环丙沙星)，90%;胎牛血清，10%。

2. 培【péi】养条件【jiàn】：气相：空【kōng】气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养【yǎng】箱湿【shī】度为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基【jī】，10%DMSO,现用现配。液氮【dàn】储存。
 
2)细胞处理：
复苏细【xì】胞：将含【hán】有lmL细胞【bāo】悬【xuán】液的冻【dòng】存管在37°C水【shuǐ】浴【yù】中迅速摇【yáo】晃解冻，加入4mL培养基混合均匀【yún】。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基【jī】后吹匀。然【rán】后将所有细【xì】胞悬液加【jiā】入培养瓶【píng】中【zhōng】培【péi】养过夜（或将细胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人神经内分泌分化的结肠癌上皮细胞对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上【shàng】清，用不含钙【gài】、镁离子的PBS润洗细胞【bāo】9-22次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于37°C培【péi】养箱中消【xiāo】化9-22分钟，然后在显【xiǎn】微镜下观察细胞消【xiāo】化情况【kuàng】，若细胞大部分变圆并脱落，迅【xùn】速拿【ná】回操作台，轻敲几下培【péi】养瓶后加【jiā】少量培养基终【zhōng】止消化【huà】。按6-8ml/瓶补加培【péi】养基【jī】，轻轻打【dǎ】匀后吸出，在1000RPM条件下离心【xīn】4分钟【zhōng】，弃去上清液，补加l-2mL培养液后吹匀。

 
将细胞悬液按【àn】1: 2到【dào】1: 5的比【bǐ】例分到【dào】新的含8ml培养基【jī】的新皿中或者【zhě】瓶中。
细【xì】胞冻【dòng】存：待细胞生长状【zhuàng】态良好【hǎo】时【shí】，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时【shí】，弃去培【péi】养基后加入少量胰酶，细【xì】胞【bāo】变圆脱落后【hòu】，加入约lml含血清的【de】培【péi】养基【jī】后【hòu】加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。

 
注意事项：
收【shōu】到细【xì】胞后，若发【fā】现干冰己挥发干净、冻存管瓶【píng】盖【gài】脱落、破【pò】损及细胞有污染【rǎn】，请立即与我们电【diàn】联。
所有动物【wù】细胞均视为有潜在【zài】的生【shēng】物危害性，必须在【zài】二级生物安全【quán】台内操作，并请【qǐng】注意【yì】防护，所有【yǒu】废液及接触【chù】过此【cǐ】细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃瓶中。

 
细胞特性：
1)来源：结肠癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人神经内分泌分化的结肠癌上皮细胞运输和保【bǎo】存【cún】：使用含【hán】有胎牛血【xuè】清【qīng】的2ml冻存【cún】管发送存活【huó】细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操【cāo】作【zuò】台弃去上清，加入推荐使用的培【péi】养【yǎng】基后转【zhuǎn】移至l〇cm培养皿或者【zhě】T25培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态【tài】良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。