人神经胶质瘤细胞（LN-18）

人神经胶质瘤细胞(LN-18)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 DMEM-H 培养基(DMEM-H，GIBCO,添加 NaHC031.5g/L)， 90%;胎【tāi】牛血清，10%。（DMEM 液体【tǐ】培养基：GIBCO，11995-065)。

2.培养条【tiáo】件：气相：空气，95%;二氧【yǎng】化碳【tàn】，5%。温度：37摄氏度，培养【yǎng】箱【xiāng】湿度为70%-80%。
3. 冻存液：90%*培养基【jī】，10%DMSO,现用现【xiàn】配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将【jiāng】含有lmL细胞悬液的冻存【cún】管在37°C水浴中迅速摇晃解冻【dòng】，加入4mL培养基混合【hé】均匀【yún】。在1000RPM条件下【xià】离心4分【fèn】钟【zhōng】，弃去上【shàng】清液【yè】，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将【jiāng】所有【yǒu】细胞悬液加【jiā】入培【péi】养瓶中培养【yǎng】过【guò】夜（或将细胞悬【xuán】液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检 查细胞密度。

细胞传代：如 果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人神经胶质瘤细胞(LN-18)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润【rùn】洗细胞9-22次。力口【kǒu】2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养瓶【píng】中，置于37°C培养箱中消化【huà】9-22分钟，然【rán】后在显【xiǎn】微镜下观察细胞【bāo】消化情况，若细胞大部分变圆【yuán】并脱【tuō】落【luò】，迅【xùn】速拿回操作台，轻【qīng】敲几下培养瓶后【hòu】加少量培养【yǎng】基终止消【xiāo】化。按6-8ml/瓶补加培【péi】养基，轻轻打【dǎ】匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分 钟，弃去上【shàng】清液【yè】，补【bǔ】加l-2mL培养液后吹【chuī】匀。将细胞【bāo】悬液【yè】按1: 2到【dào】1: 5的【de】比例分到新的含8ml培养基的新皿中【zhōng】或者瓶中【zhōng】。

 
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
细胞冻存【cún】：待【dài】细胞【bāo】生长状态良好时，可进【jìn】行【háng】细胞冻存。贴壁细胞冻【dòng】存时，弃 去培养基后【hòu】加【jiā】入少【shǎo】量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约lml含血【xuè】清的培养基后 加入冻存管中，再添【tiān】加1〇%DMSO后进行冻【dòng】存【cún】。

 
注意事项：
收到细胞【bāo】后【hòu】，若发现干冰己挥发干净、冻【dòng】存管瓶【píng】盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我【wǒ】们电联。
所有动物细胞均【jun1】视为有潜在的生物危害【hài】性【xìng】，必须在二级生【shēng】物安全台内操作，并请注意【yì】防护，所有废液及接【jiē】触【chù】过此细胞【bāo】的器皿【mǐn】需【xū】要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：神经胶质瘤细胞
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人神经胶质瘤细胞(LN-18)运输和【hé】保【bǎo】存：使用含有胎牛血清的2ml冻【dòng】存【cún】管发送存活细胞。收到细胞【bāo】后， 可【kě】在1000RPM，常温条件下【xià】，离心5min后，于洁净操作【zuò】台【tái】弃【qì】去上清，加入推【tuī】荐使用的培养基后转移至l〇cm培【péi】养皿【mǐn】或【huò】者T25培养【yǎng】瓶中培养，传代达到细胞生长【zhǎng】 状态良好时，再进【jìn】行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。