人卵巢癌细胞（OV-90）

人卵巢癌细胞(OV-90)
细胞介绍：
该细胞系来源【yuán】于一位法国白人患者，患【huàn】者【zhě】没有卵巢【cháo】癌家族史。建系于【yú】1992年。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备【bèi】 MEM 培养基(MEM:GIBCO);北美【měi】胎牛血清(United States， GIBCO)，15%;双【shuāng】抗 1%。
2.培养条件：气相【xiàng】：空气，95%;二氧化碳，5%。温度【dù】：37摄氏度，培养箱湿【shī】度为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
1. 复【fù】苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存【cún】管【guǎn】在37°C水浴中迅速【sù】摇晃解冻【dòng】，加入4mL培养【yǎng】基混合均匀。在1000RPM条件【jiàn】下离心4分【fèn】钟【zhōng】，弃【qì】去上清液，补加【jiā】l-2mL培【péi】养基后吹匀。然后将【jiāng】所有细胞悬液加【jiā】入培【péi】养瓶中培养过夜（或将细【xì】胞悬液加入l〇cm皿中，加【jiā】入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2.细【xì】胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可【kě】进行传代培养【yǎng】。
 
人卵巢癌细胞(OV-90)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培养上清，用不【bú】含钙、镁离子的PBS润【rùn】洗【xǐ】细胞9-21次。力口2m丨消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于【yú】37°C培养箱中消化9-21分钟，然后【hòu】在【zài】显微镜下观察细【xì】胞消化情况，若细【xì】胞大部分变圆并脱落，迅速拿回【huí】操【cāo】作【zuò】台，轻【qīng】敲几下培养瓶【píng】后加少量培【péi】养【yǎng】基终止消化。按6-8ml/瓶补【bǔ】加培养基，轻轻打匀【yún】后吸【xī】出，在1000RPM条件下离心4分【fèn】钟，弃【qì】去上清液，补加l-2mL培养液后吹匀【yún】。将【jiāng】细胞悬液按【àn】1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的新【xīn】皿中或者【zhě】瓶中。

3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细【xì】胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底9-21次后加【jiā】入lml胰【yí】酶，细胞变圆脱落后，加入2ml*培【péi】养基【jī】终止消化【huà】，可【kě】使用血【xuè】球【qiú】计数板计数。1000RPM离心5分钟去【qù】掉上清【qīng】。用血清重【chóng】悬浮，加DMSO至终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按【àn】每【měi】lml的【de】数量分配到冻【dòng】存管【guǎn】中，注意冻存管做好标识。本【běn】公【gōng】司【sī】按每个冻存管细胞数目大【dà】于【yú】1X106个细胞冻存【cún】。将冻存管置于程序降温盒中，放【fàng】入-80度冰箱，至少2个小时以【yǐ】后【hòu】转入液氮【dàn】灌储存。记录冻存管【guǎn】位置以便下【xià】次拿取。

 
注意事项：
收【shōu】到细胞后，若【ruò】发现干冰【bīng】己【jǐ】挥发干净【jìng】、冻【dòng】存管瓶盖脱落、破损及细胞有【yǒu】污染【rǎn】，请立即与我们电联。
所【suǒ】有动物细胞均【jun1】视为有潜在的生物【wù】危【wēi】害性【xìng】，必须【xū】在【zài】二【èr】级生物安全台内操【cāo】作，并请注意防护【hù】，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：卵巢；腹水转移
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人卵巢癌细胞(OV-90)运输和保存：使用T25瓶充液【yè】发【fā】送活细胞。收到细胞后【hòu】，请先在显【xiǎn】微镜【jìng】下检查细胞生长状态【tài】，并将T25瓶【píng】置于培养箱【xiāng】约【yuē】6h或过夜后，再次检查【chá】细【xì】胞状态。若【ruò】状态良好，可按【àn】照以下细胞培养步骤进行细胞后续处理操作【zuò】。若发【fā】现可疑污染物，请及【jí】时与我们【men】取得电联。

细胞用途：仅供使用。