人前列腺癌细胞（PC-3M）

人前列腺癌细胞(PC-3M)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基(RPMI-1640:GIBCO)，90%;胎牛血清【qīng】，10%。
2. 培养条【tiáo】件：气相：空【kōng】气，95%;二氧化碳，5%。温度【dù】：37摄氏度，培养箱湿度【dù】为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现【xiàn】用现【xiàn】配。液氮储存。
 
2)细胞处理
复苏【sū】细【xì】胞：将【jiāng】含有lmL细胞悬液【yè】的冻存管【guǎn】在37°C水浴中【zhōng】迅速摇晃解冻，加入4mL培养【yǎng】基混【hún】合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清【qīng】液，补加l-2mL培养基后吹匀。然【rán】后将所【suǒ】有细胞悬液加入培养瓶中培【péi】养【yǎng】过【guò】夜（或【huò】将细胞【bāo】悬液加入【rù】l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人前列腺癌细胞(PC-3M)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗【xǐ】细【xì】胞9-21次。力口2m丨【shù】消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养瓶【píng】中，置【zhì】于【yú】37°C培养箱中消化9-21分【fèn】钟，然【rán】后在显微【wēi】镜【jìng】下观察细【xì】胞【bāo】消化【huà】情况，若细胞大部分变【biàn】圆并脱落，迅速拿回操【cāo】作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基【jī】终止消化。按6-8ml/瓶【píng】补加培养基，轻轻打匀后【hòu】吸出，在1000RPM条件【jiàn】下离【lí】心4分钟，弃去上清液，补加【jiā】l-2mL培养液后吹【chuī】匀。将细胞【bāo】悬【xuán】液【yè】按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培【péi】养基的新皿中或者瓶中【zhōng】。

 
3)细胞冻【dòng】存：待细胞生长状态良好时，可【kě】进行细胞冻存。贴壁细【xì】胞【bāo】冻存【cún】时，弃去培养基后加入【rù】少量胰酶【méi】，细胞变圆【yuán】脱落后，加入约lml含血清的培养基后加入冻存管中，再添【tiān】加1〇%DMSO后进行【háng】冻存【cún】。

 
注意事项：
收到细胞后，若【ruò】发现【xiàn】干冰己挥发干净、冻存管【guǎn】瓶盖脱落、破损及细【xì】胞【bāo】有污染，请立即与我们电联【lián】。
所有动【dòng】物细胞均视为有潜在的生【shēng】物危害性，必须在二级【jí】生物安全【quán】台内操作，并请注意【yì】防护【hù】，所有废【fèi】液及接【jiē】触过此细胞的器【qì】皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：肺癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人前列腺癌细胞(PC-3M)运输和【hé】保存【cún】：使用含有胎牛血清的2ml冻存【cún】管发送存【cún】活细胞。收【shōu】到细胞【bāo】后【hòu】，可在1000RPM，常温【wēn】条件下，离心5min后，于洁净【jìng】操作台弃去上清，加入推荐使【shǐ】用的培养【yǎng】基后转【zhuǎn】移至l〇cm培养皿或者T25培养瓶中培养，传代达【dá】到细【xì】胞【bāo】生长状【zhuàng】态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。