人胰腺癌细胞（PC3）

人胰腺癌细胞(PC3)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备F-12K培养基（F-12K : GIBCO);北美胎牛【niú】血清【qīng】，10%; PS 1%。
2.培养条件：气相：空【kōng】气，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温度：37摄氏度，培养【yǎng】箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
1. 复苏细胞：将含【hán】有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃【huǎng】解冻，加入4mL培【péi】养基【jī】混【hún】合【hé】均匀【yún】。在1000RPM条件下离【lí】心4分钟，弃去【qù】上【shàng】清液，补加l-2mL培养基后吹匀【yún】。然后将所有细【xì】胞悬液加入培【péi】养【yǎng】瓶中培养【yǎng】过夜（或将【jiāng】细胞悬液加【jiā】入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2.细胞传【chuán】代【dài】：如果细胞密度达80%-90%，即【jí】可进行传代培养。
 
人胰腺癌细胞(PC3)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上清【qīng】，用不含钙、镁离子的【de】PBS润洗【xǐ】细胞【bāo】9-21次。力【lì】口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于37°C培【péi】养箱中消化9-21分钟，然后【hòu】在显【xiǎn】微镜【jìng】下【xià】观【guān】察细胞【bāo】消化情况，若细胞大部分变圆并脱【tuō】落【luò】，迅【xùn】速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。按6-8ml/瓶【píng】补加培【péi】养基，轻轻打匀后吸出【chū】，在【zài】1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加【jiā】l-2mL培【péi】养【yǎng】液后吹匀。将【jiāng】细胞【bāo】悬液按1: 2到【dào】1: 5的比例分【fèn】到新的含8ml培养基的新皿中或者【zhě】瓶【píng】中。

3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细胞【bāo】冻【dòng】存时【shí】，弃去培养基后，PBS清【qīng】洗瓶【píng】底9-21次后加入【rù】lml胰酶，细【xì】胞变圆脱落后，加入2ml*培养基终【zhōng】止消化，可使用血球计【jì】数板计数。1000RPM离心5分【fèn】钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至【zhì】终【zhōng】浓度为【wéi】10%。加入DMSO后迅速混匀，按【àn】每【měi】lml的数量分【fèn】配到冻存管中，注意冻【dòng】存管【guǎn】做【zuò】好【hǎo】标识。本公司按每【měi】个冻存管【guǎn】细胞数目大于1X106个细胞冻存。将冻存管【guǎn】置于程序【xù】降温盒【hé】中，放入-80度冰箱，至少2个【gè】小时以后转【zhuǎn】入液氮【dàn】灌储存。记录【lù】冻存管【guǎn】位置以便下次拿取。

 
注意事项：
收到细胞后，若发现【xiàn】干冰己挥发干净、冻存【cún】管【guǎn】瓶【píng】盖脱【tuō】落、破损及细胞有【yǒu】污染，请立即与我们电联【lián】。
所【suǒ】有动【dòng】物【wù】细胞均视为【wéi】有潜在的生物【wù】危害性，必须在二级生物安全台内操作，并【bìng】请注意防护，所有【yǒu】废液及【jí】接触过此细胞的器皿需【xū】要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：胰腺癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人胰腺癌细胞(PC3)运输和保存：使【shǐ】用T25瓶【píng】充【chōng】液发【fā】送活细胞。收到【dào】细胞后，请先【xiān】在【zài】显微镜下检查细胞生长状态，并将T25瓶置于培养箱约6h或【huò】过夜后，再次检【jiǎn】查细【xì】胞状态【tài】。若状【zhuàng】态【tài】良好，可进行细胞后【hòu】续【xù】处理操作，按照以下【xià】方式进行。若发现【xiàn】可疑污染物，请及时与我们取得电联。

细胞用途：仅供使用。