人非小细胞肺癌细胞（A549）

人非小细胞肺癌细胞(A549)
细胞介绍：
该细【xì】胞系由DJ.Griad通过肺癌组织移植培养建【jiàn】系，患者为58岁白人男【nán】性。A549能通过胞苷二【èr】磷酸【suān】胆碱途【tú】径合成含有高含【hán】量不饱【bǎo】和脂肪酸的卵【luǎn】磷【lín】脂。
 
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备F-12K培养基【jī】（F-12K，GIBCO)，90%;胎牛血清【qīng】，10%。
2.培养条件：气【qì】相：空气，95%;二氧化碳，5%。温【wēn】度：37°C，培养箱湿度【dù】 为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细【xì】胞悬液的冻【dòng】存管迅速放【fàng】入37°C水浴中（水面要低 于冻存管盖部）摇晃解冻【dòng】，移【yí】入事【shì】先准【zhǔn】备好的含【hán】有4mL培养基的15ml离【lí】心管中混合均匀。在1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃【qì】去【qù】上清液，加入lmL培 养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含【hán】有5ml培养【yǎng】基的培养【yǎng】瓶中【zhōng】培【péi】养【yǎng】过夜。第二天换液【yè】并检【jiǎn】查细胞密【mì】度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人非小细胞肺癌细胞(A549)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培【péi】养上清，用不含钙、镁离子【zǐ】的PBS润洗【xǐ】细胞【bāo】9-21次。力口【kǒu】 2m丨消【xiāo】化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶中，置于【yú】37°C培【péi】养箱中消化9-21分【fèn】钟【zhōng】，然后在显微镜下观【guān】察细【xì】胞消化情况，若细【xì】胞大【dà】部 分变【biàn】圆并脱落，迅【xùn】速拿回操作台，轻敲【qiāo】几【jǐ】下培养瓶后加入3ml此细胞的 培养基【jī】终【zhōng】止消化。轻轻吹【chuī】打后吸【xī】出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入lmL培养液后【hòu】吹匀。移入【rù】到事先准【zhǔn】备好【hǎo】的含有5ml培养【yǎng】基的T-25培【péi】养瓶中或含有14ml培【péi】养 基的T-75培养瓶中培养。
 
细胞冻存：待细胞【bāo】生长状态良好时，可进行细胞冻【dòng】存。贴壁细胞冻存时，先【xiān】要【yào】消化处理【lǐ】并进行细【xì】胞计数。消【xiāo】化方法按【àn】照【zhào】细胞传代【dài】方法【fǎ】的9-21步【bù】骤进行，后的重悬液使用血【xuè】清。悬浮细胞【bāo】直接计数【shù】后离心，用【yòng】血【xuè】清重【chóng】悬浮，加DMSO至终浓度为10%。加【jiā】入DMSO后迅速混匀，按每lml的数量【liàng】分【fèn】配到冻存管【guǎn】中。本公司按每个冻【dòng】存管【guǎn】细【xì】胞数目大于1X106个细胞冻存。
 
注意事项：
收到细胞后，若发现干【gàn】冰己挥发干净、冻【dòng】存管瓶盖【gài】脱落、破损及细胞有【yǒu】污染， 请立【lì】即【jí】与我们【men】电联
所有【yǒu】动物细胞均视为有潜在的生【shēng】物危害性，必【bì】须在【zài】二级【jí】生物安全【quán】台内操作， 并请注意防【fáng】护，所有废液及【jí】接触过此细胞的器【qì】皿需要【yào】灭菌【jun1】后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：肺癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人非小细胞肺癌细胞(A549)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显【xiǎn】微镜下【xià】确认细胞【bāo】生长状【zhuàng】态，去掉封口膜并将T25瓶【píng】置于【yú】37°C培养约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞长满（90%以上）请及时【shí】进行细胞传代，传代【dài】培【péi】养用6ml本公司附 带的*培养【yǎng】基【jī】。
5.接【jiē】到细【xì】胞次【cì】日，请检查细胞【bāo】是否污【wū】染，若发【fā】现污染或疑似污染，请及【jí】时与我们取得电联。
细胞用途：仅供使用。