人子宫内膜腺癌（转移）细胞 （AN3CA）

人子宫内膜腺癌(转移)细胞 (AN3CA)
细胞介绍：
AN3CA细【xì】胞建系于1964年。它衍生于子宫【gōng】内【nèi】膜癌【ái】患者淋【lín】巴结转移组织【zhī】，具有癌 细胞的基本特性，能在体外长期传代培养【yǎng】，接种【zhǒng】实验动物【wù】产【chǎn】生明显肿瘤。但细胞【bāo】的【de】生物【wù】学【xué】特性及超【chāo】微结构尚未【wèi】深入研究，仅发【fā】现该细胞系促黑激素合【hé】成为阴【yīn】性。细胞常用于人子宫内膜癌细胞生物学及其相关特性研【yán】究。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备MEM培【péi】养基(MEM:GIBCO)，90%;北【běi】美胎牛血【xuè】清(United States，GIBCO，货号16000-044)，10%。
2.培养条件【jiàn】：气相：空气【qì】，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度【dù】，培养【yǎng】箱湿【shī】度为70%-80%。
3.冻【dòng】存液：90%*培养基【jī】，10%DMSO,现用现配。液氮【dàn】储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有【yǒu】lmL细【xì】胞悬液的冻存管在37°C水【shuǐ】浴中迅速摇晃解冻，加入【rù】4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养【yǎng】基后吹匀。然后将所【suǒ】有细胞悬液加入培养【yǎng】瓶中培养过夜【yè】（或将【jiāng】 细胞悬【xuán】液加【jiā】入【rù】l〇cm皿中，加【jiā】入约8ml培【péi】养【yǎng】基，培养过【guò】夜【yè】）。第二天换液并【bìng】检查细胞【bāo】密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人子宫内膜腺癌(转移)细胞 (AN3CA)对于贴壁【bì】细胞，传代可参考以下方法：弃去培养上清，用不含钙、镁离子【zǐ】的PBS润洗细【xì】胞9-21次。力口【kǒu】2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养【yǎng】瓶中【zhōng】，置【zhì】于37°C培养【yǎng】箱中消化9-21分钟，然后在显微镜【jìng】下观察细胞消化【huà】情况，若【ruò】细胞大部 分变【biàn】圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几【jǐ】下培养瓶后加【jiā】少量【liàng】培养基终止消化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻【qīng】打【dǎ】匀后吸出，在1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃去上【shàng】清液，补加l-2mL培养液【yè】后吹匀【yún】。将【jiāng】细胞悬液【yè】按1: 2到1: 5的比例分到新【xīn】的【de】含8ml培养基的新【xīn】皿中【zhōng】或者【zhě】瓶中。
 
细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细【xì】胞冻存时【shí】，弃去培养基后加入【rù】少量【liàng】胰【yí】酶，细胞【bāo】变圆脱【tuō】落【luò】后，加入约lml含血【xuè】清【qīng】的培【péi】养【yǎng】基后【hòu】 加入冻【dòng】存管中，再【zài】添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
注意事项：
收到细【xì】胞后，若发现干冰己挥发干【gàn】净、冻【dòng】存管【guǎn】瓶盖脱落、破【pò】损及细【xì】胞有污染，请立即与我们电【diàn】联【lián】。
所有动物细【xì】胞均视为有潜在的生物危害性【xìng】，必须在二级生物安全台内操【cāo】作，并【bìng】请注【zhù】意【yì】防【fáng】护，所有废液及【jí】接触过【guò】此细胞的【de】器皿需要灭菌后【hòu】方能丢【diū】弃。
 
细胞特性：
1)来源：子宫内膜
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
  
人子宫内膜腺癌(转移)细胞 (AN3CA)运输和【hé】保存：使用含有胎【tāi】牛血清的2ml冻存管发【fā】送存活细胞。收到【dào】细胞【bāo】后【hòu】， 可在1000RPM，常温条件【jiàn】下，离【lí】心5min后，于【yú】洁净【jìng】操作台【tái】弃去上清，加入推荐使用的培养基【jī】后转移至l〇cm培养皿或【huò】者T25培养瓶中培养，传代达到细胞生【shēng】长状态良【liáng】好时，再进行冻存。具体操【cāo】作见细胞【bāo】培养步骤【zhòu】。
细胞用途：仅供使用。