人视网膜上皮细胞（ARPE-19）

人视网膜上皮细胞(ARPE-19)
细胞介绍：
该【gāi】细胞系源自于一名【míng】19岁车【chē】祸罹难的健康男【nán】性【xìng】的视网膜组织【zhī】，由Amy Aotaki-Keen建系于1986年。该细胞系表达视网膜色素细胞【bāo】*的分子标记如胞 内视【shì】黄醛结合【hé】蛋白和PRE-65。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 DMEM/F12 培养【yǎng】基(DMEM/F12，GIBCO);北美胎【tāi】牛血清【qīng】，10%;双抗1%。
2.培养条【tiáo】件：气相【xiàng】：空气，95%;二氧化碳，5%。温【wēn】度：37摄氏度，培养箱 湿度为70%-80%。
3. 冻存液：90%血【xuè】清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
1.复苏细胞：将【jiāng】含有lmL细胞悬液【yè】的冻存管【guǎn】在【zài】37°C水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件【jiàn】下【xià】离心4分钟【zhōng】，弃去上清液【yè】，补加l-2mL培【péi】养【yǎng】基后吹匀。然后将所【suǒ】有细胞悬液加【jiā】入培养瓶中【zhōng】培养过夜（或【huò】将【jiāng】细【xì】胞悬液加入l〇cm皿中，加【jiā】入约8ml培养基，培养过夜）。第二天【tiān】换【huàn】液并检查细胞【bāo】密度。
2.细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可【kě】进【jìn】行【háng】传【chuán】代【dài】培养。
 
人视网膜上皮细胞(ARPE-19)对于贴【tiē】壁细【xì】胞，传代可参考【kǎo】以【yǐ】下方法：弃去培养【yǎng】上清，用不含【hán】钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。力口2m丨【shù】消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养【yǎng】瓶中【zhōng】，置于37°C培【péi】养箱中【zhōng】消化9-21分钟，然后在【zài】显微镜下观察细胞【bāo】消【xiāo】化情【qíng】况，若细胞大部分变圆并脱【tuō】落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止【zhǐ】 消化。按6-8ml/瓶【píng】补【bǔ】加培【péi】养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下【xià】离【lí】心4分钟【zhōng】，弃去上【shàng】清液，补加【jiā】l-2mL培养【yǎng】液后吹匀。将【jiāng】细【xì】胞悬液【yè】按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养【yǎng】基的新皿中或者瓶中。
3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细胞【bāo】冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底9-21次后加入lml胰【yí】酶，细【xì】胞变圆脱落后，加入2ml*培养基【jī】终止消化，可【kě】使用血球【qiú】计数板计数。1000RPM离心5分钟去掉上【shàng】清。用血清重悬浮，加DMSO至终浓度为【wéi】 10%。加入【rù】DMSO后迅速混匀，按每lml的数量分配【pèi】到冻存管中，注意冻【dòng】存 管【guǎn】做【zuò】好【hǎo】标识。本公【gōng】司按每个冻存管【guǎn】细胞数目大于1X106个【gè】细胞冻存。将冻存【cún】管置于程序降温盒中，放入-80度【dù】冰箱，至少【shǎo】2个小时【shí】以后【hòu】转入液 氮灌储存。记【jì】录冻存管位置以便【biàn】下次拿【ná】取【qǔ】。
 
注意事项：
收到细胞后【hòu】，若发现干冰【bīng】己挥发【fā】干净、冻存管【guǎn】瓶盖脱落、破损及细胞【bāo】有污染，请【qǐng】立即与我【wǒ】们电【diàn】联。
所【suǒ】有动物细胞均视为【wéi】有潜在【zài】的生物危害性，必须在二级生物安【ān】全台内【nèi】操作，并请【qǐng】注意防护【hù】，所有废液及接触过此细【xì】胞的器【qì】皿需【xū】要【yào】灭菌后方能丢【diū】弃。
 
细胞特性：
1)来源：视网膜
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
人视网膜上皮细胞(ARPE-19)运输和【hé】保【bǎo】存：可选择干冰运输及发【fā】送复【fù】苏【sū】存活细【xì】胞方式【shì】：（1)干冰运输，收【shōu】到后立即转入液氮冻【dòng】存【cún】或【huò】直接复苏【sū】；（2)存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细【xì】 胞生长状态良好时，再进【jìn】行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。