人甲状腺癌细胞 （B-CPAP）

人甲状腺癌细胞 (B-CPAP)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备人【rén】甲状【zhuàng】腺癌细胞B-CPAP*培【péi】养基(配方(100ml): RPMI-1640 (lnvitrogen,11875093) 89 ml FBS (Biochrom, S4115) 10 ml NEAA(lnvitrogen, 11140)1 ml
2.培【péi】养条件：气【qì】相：空气【qì】，95%;二氧【yǎng】化碳，5%。温度：37摄氏【shì】度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培【péi】养基，10%DMSO,现【xiàn】用现配【pèi】。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将【jiāng】含有lmL细胞悬液的冻【dòng】存管在37°C水浴中迅【xùn】速摇晃解冻【dòng】，加入4mL培养【yǎng】基混合均匀。在1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后吹【chuī】匀。然后将【jiāng】所有细胞悬液加【jiā】入培养瓶中培养过夜【yè】（或将细【xì】胞悬【xuán】液【yè】加入【rù】l〇cm皿【mǐn】中，加【jiā】入约8ml培养基，培【péi】养过夜）。第二天换液并检 查细【xì】胞密度【dù】。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人甲状腺癌细胞 (B-CPAP)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁【měi】离子的PBS润洗细胞【bāo】9-21次【cì】。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置【zhì】于37°C培养箱中化9-21分钟【zhōng】，然后在【zài】显微镜下观察细胞【bāo】消【xiāo】化情况【kuàng】，若【ruò】细胞大部【bù】 分变圆并脱落，迅速【sù】拿回操作台，轻敲几下【xià】培养瓶【píng】后加【jiā】少【shǎo】量培养基终止【zhǐ】消【xiāo】化。按6-8ml/瓶补加培【péi】养基【jī】，轻轻【qīng】打匀后吸出，在1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃去上清液【yè】，补加l-2mL培养液后【hòu】吹匀。将细胞悬液按【àn】1: 2到1: 5的比例分到新【xīn】的含【hán】8ml培养基【jī】的新皿中或者瓶中。
 
细胞冻存：待细【xì】胞生【shēng】长【zhǎng】状态良【liáng】好时【shí】，可进行细胞冻存【cún】。贴壁细胞【bāo】冻存时，弃去培养基【jī】后加入少【shǎo】量【liàng】胰酶，细胞【bāo】变圆【yuán】脱落后，加入约lml含血清的培养基后【hòu】加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进【jìn】行冻存。
 
注意事项：
收到细胞后，若发现干【gàn】冰己挥发干【gàn】净、冻存管【guǎn】瓶【píng】盖脱【tuō】落、破【pò】损及细胞有污染，请立即与【yǔ】我们【men】电联。
所有动物细【xì】胞【bāo】均视为有潜在的【de】生物危害性，必须在二级【jí】生【shēng】物安【ān】全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞【bāo】的器皿需要灭菌【jun1】后【hòu】方【fāng】能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：甲状腺，甲状腺瘤
2)形态：纺锤状或圆形细胞，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人甲状腺癌细胞 (B-CPAP)运输和保存【cún】：使用含有胎【tāi】牛血【xuè】清【qīng】的2ml冻【dòng】存管发送存活细胞。收到细胞【bāo】后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于【yú】洁净【jìng】操作台弃去【qù】上清，加入推荐使【shǐ】用【yòng】的培养基【jī】后转【zhuǎn】移至l〇cm培【péi】养皿或者T25培养瓶中培养【yǎng】，传代达【dá】到细【xì】胞生长状态良好时，再进行冻存。具体【tǐ】操作【zuò】见细胞培养【yǎng】步骤【zhòu】。
细胞用途：仅供使用。