人正常肺上皮细胞（BEAS-2B）

人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)
细胞介绍：
从一【yī】位非癌个体的正常人支气管上皮【pí】病理【lǐ】切片分离出【chū】上皮细胞。这些细胞用腺【xiàn】病 毒12-SV40杂交感染并【bìng】克隆。BEAS-2B细【xì】胞【bāo】保留了对血【xuè】清【qīng】反应进行【háng】鳞关分【fèn】化的【de】能力【lì】，并有【yǒu】用于【yú】筛选诱导或影【yǐng】响【xiǎng】分化及致癌的化学或生【shēng】物制剂。细胞角蛋白及SV40抗原染色阳性。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.上皮培【péi】养【yǎng】基（EpiCM-A:Sciencell4131);胎牛血清，5%;上皮生长【zhǎng】因子
1%。
2.培养条【tiáo】件：气相：空气，95%;二氧化【huà】碳，5%。温度：37摄氏【shì】度【dù】，培【péi】养箱湿度为70%-80%。
3. 冻【dòng】存液：90%*培养基，10%DMSO,现用现【xiàn】配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存【cún】管在37°C水浴【yù】中迅速摇【yáo】晃解冻，加入4mL培养基混【hún】合均匀。在1000RPM条件下离心【xīn】4分【fèn】钟，弃去上【shàng】清液，补【bǔ】加l-2mL培养【yǎng】基后吹【chuī】匀。然后将所有细胞悬【xuán】液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬【xuán】液【yè】加【jiā】入【rù】l〇cm皿中，加入【rù】约8ml培养基，培养过【guò】夜【yè】）。第二天换液并检查细【xì】胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去培养上清，用不含钙、镁离【lí】子的PBS润洗细胞9-21次【cì】。力【lì】口【kǒu】2m丨【shù】消【xiāo】化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养瓶中，置于【yú】37°C培养【yǎng】箱中消化9-21分钟，然后在显微镜下观察细胞消化【huà】情况，若细胞大部分变圆并脱落【luò】，迅速【sù】拿回【huí】操作台【tái】，轻【qīng】敲【qiāo】几下培养瓶后加【jiā】少量培【péi】养基终【zhōng】止消化。按6-8ml/瓶补加培养【yǎng】基，轻轻打匀后吸出，在【zài】1000RPM条件下离心4分钟，弃去【qù】上清液，补【bǔ】加【jiā】l-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1: 2到【dào】1: 5的比例分到新【xīn】的含【hán】8ml培养基的新皿中或者【zhě】瓶中。
 
细【xì】胞【bāo】冻存：待细胞生长状态良好时，可【kě】进行【háng】细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃【qì】去【qù】培【péi】养基后加入少量胰【yí】酶【méi】，细胞变圆脱落后，加入约lml含血【xuè】清的培养【yǎng】基后加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻【dòng】存。
 
注意事项：
收到细胞后，若发现干【gàn】冰【bīng】己【jǐ】挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有【yǒu】污染【rǎn】，请【qǐng】立【lì】即与我【wǒ】们电联。
所有动物细胞均视为有【yǒu】潜在的生物危害性，必须在【zài】二【èr】级生物【wù】安全台内操作，并【bìng】请【qǐng】注意防【fáng】护【hù】，所有废液及接触【chù】过此细【xì】胞的器皿需要灭菌后【hòu】方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：肺;支气管
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装

人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)运输【shū】和【hé】保存：使【shǐ】用含有胎牛血清的2ml冻存管【guǎn】发送存活细胞。收到【dào】细胞后，可在【zài】1000RPM，常温【wēn】条【tiáo】件【jiàn】下，离心5min后，于洁净操作台弃【qì】去上清【qīng】，加入推荐使用【yòng】的培【péi】养基后转移【yí】至l〇cm培养皿或【huò】者【zhě】T25培【péi】养瓶中培养，传代达到【dào】细胞【bāo】生长 状态良好时，再进行冻【dòng】存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。