小鼠胚胎成纤维细胞 （3T3-L1）

小鼠胚胎成纤维细胞 (3T3-L1)
细胞介绍
L1是通过克隆分离得到的3T3(swiss小【xiǎo】白鼠)的连续【xù】亚【yà】株。当细胞从快速【sù】分裂到长满且接触抑制时【shí】，该细胞经过【guò】前脂肪向脂肪样逆转。培【péi】养【yǎng】液【yè】中，高血清含【hán】量可以促【cù】进脂【zhī】肪积累。
 
细胞特性
1)来源：小鼠胚胎
2)形态：成纤维细胞
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保存【cún】：使用含有【yǒu】胎牛血清的【de】2ml冻【dòng】存管发送存活【huó】细胞。收到【dào】细【xì】胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净【jìng】操作【zuò】台弃去【qù】上清【qīng】，加【jiā】入推荐【jiàn】使用的培养基后转移【yí】至l〇cm培养皿【mǐn】或【huò】者T25培养瓶中【zhōng】培养，传【chuán】代达到细胞【bāo】生长【zhǎng】状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步【bù】骤。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠胚胎成纤维细胞 (3T3-L1)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备【bèi】DMEM培养基(DMEM，GIBCO)，90%;北【běi】美胎牛血【xuè】清 (United States，GIBCO，货号16000-044)，10%。
2. 培养条件：气【qì】相：空气，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温度【dù】：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存【cún】液：90%*培养基，10%DMSO,现【xiàn】用现配【pèi】。液氮储存。
2)细胞处理：
1.复苏细胞：将含有lmL细【xì】胞【bāo】悬液的冻【dòng】存管在37°C水浴【yù】中迅【xùn】速摇晃解【jiě】冻，加入4mL培养基【jī】混合均匀。在1000RPM条件下离【lí】心4分钟【zhōng】，弃去上清液，补加【jiā】l-2mL培养基后吹匀。然后将【jiāng】所有细胞悬液加入【rù】培养瓶中【zhōng】培养过夜【yè】（或将【jiāng】细【xì】胞悬液加入l〇cm皿中【zhōng】，加【jiā】入约8ml培【péi】养基，培养过夜）。第二天换液并检查【chá】细胞密度。
2.细【xì】胞传【chuán】代：如果【guǒ】细胞密【mì】度达80%-90%，即可进行传代培养。对于贴壁细胞，传代可参考以下【xià】方法：弃【qì】去培养上清，用不含钙【gài】、镁离子的PBS润【rùn】洗【xǐ】细胞【bāo】9-21次。力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶中，置于37°C培养箱中消化9-21分钟，然【rán】后在显微【wēi】镜下观【guān】察细胞【bāo】消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操【cāo】作台，轻敲几下培养瓶【píng】后加2ml*培养基终【zhōng】止【zhǐ】消化。按6-8ml/瓶补加培【péi】养基【jī】，轻轻打匀后吸出，在【zài】1000RPM条【tiáo】件【jiàn】下离心4分钟，弃去上清液，补加【jiā】l-2mL培养【yǎng】液后吹匀。将细【xì】胞悬液按1: 2到1: 5的【de】比例分到新的含8ml培养基的新皿中【zhōng】或【huò】者。
3.细胞冻【dòng】存：待细胞生长状态良好时【shí】，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；细【xì】胞【bāo】冻存时，弃去培养基后，PBS清洗【xǐ】瓶底9-21次后加入【rù】lml胰【yí】酶，细胞变【biàn】圆【yuán】脱落【luò】后，加入2ml*培【péi】养基【jī】终止消化，可使用【yòng】血球【qiú】计【jì】数板计数。
lOOOrpm离【lí】心4min去掉上清。用血【xuè】清重悬【xuán】浮，加DMSO至终【zhōng】浓度为 10%。加入DMSO后【hòu】迅速【sù】混匀，按【àn】每lml的数【shù】量分配到冻存管中【zhōng】，注意冻存 管【guǎn】做【zuò】好标识【shí】。本公司按【àn】每个冻存【cún】管细胞数【shù】目大于1X106个细胞冻存。将【jiāng】冻存管置于程【chéng】序降温盒中，放【fàng】入-80度冰箱【xiāng】，至少2个小时以后转入【rù】液 氮灌【guàn】储存。记录冻存管位置以便下次拿【ná】取。
 
小鼠胚胎成纤维细胞 (3T3-L1)注意事项：
收到细胞后【hòu】，若发【fā】现干冰己挥发干【gàn】净、冻存管【guǎn】瓶盖脱落、破损及【jí】细胞有【yǒu】污染，请立即与我们电联。
所有动物细胞均【jun1】视为有潜在的生物危害性，必须在二级【jí】生【shēng】物【wù】安全台【tái】内操作，并请注意防【fáng】护，所有【yǒu】废液及接触过此细【xì】胞【bāo】的器皿需要【yào】灭菌后方能丢弃【qì】,瓶中。