人肝癌细胞（BEL-7402）

人肝癌细胞(BEL-7402)
细胞介绍：
BEL-7402细【xì】胞株是【shì】1974年从临床肝癌【ái】手术标本【běn】中建立【lì】的。细胞【bāo】群【qún】体【tǐ】倍增【zēng】时间为【wéi】20小【xiǎo】时。移【yí】植到处【chù】理过的wistar大鼠中的能形成【chéng】肿瘤结节。细胞形态呈上皮样细胞。在电子显微镜下亦显示上皮细胞所具有的桥粒和【hé】张力原纤维，与临床肝癌 细胞相似。分瓶培【péi】养第【dì】四天时，其有丝分裂指数约为7%。BEL-7402细胞【bāo】的染色 体数【shù】为不【bú】足【zú】三倍体，有一【yī】个异常的近端着丝点【diǎn】染色体。间接免疫荧光法【fǎ】测 BEL-7402细胞内【nèi】的AFP为阳性反【fǎn】应。LDH同工酶谱显示与成年人【rén】肝【gān】细胞不同【tóng】，而与【yǔ】人胚肝及临床【chuáng】肝癌相近。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培【péi】养基【jī】(RPMI-1640:GIBCO,90%;北美胎牛 血清(United States，GIBCO，，10%。
2.培养条【tiáo】件：气【qì】相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培【péi】养箱 湿度【dù】为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基【jī】，10%DMSO,现用现配。液【yè】氮【dàn】储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞【bāo】悬液【yè】的冻存【cún】管在【zài】37°C水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合【hé】均【jun1】匀。在【zài】1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，补加【jiā】l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬【xuán】液加【jiā】入培【péi】养瓶【píng】中培养【yǎng】过夜【yè】（或将细胞悬液加入l〇cm皿【mǐn】中，加入约8ml培养基，培养【yǎng】过夜）。第二【èr】天【tiān】换液并检 查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人肝癌细胞(BEL-7402)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培养【yǎng】上清，用不含钙【gài】、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中【zhōng】，置【zhì】于37°C培养【yǎng】箱中消化9-21分钟，然后在显【xiǎn】微镜【jìng】下【xià】观【guān】察细胞消化【huà】情况，若细胞【bāo】大部 分变圆并【bìng】脱落，迅速【sù】拿回操【cāo】作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终【zhōng】止【zhǐ】消化。按6-8ml/瓶补加【jiā】培养【yǎng】基，轻轻打匀后【hòu】吸出，在1000RPM条件下离【lí】心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养液后吹匀。将细胞悬【xuán】液按1: 2到【dào】1: 5的比【bǐ】例分【fèn】到新的含8ml培养基的新【xīn】皿中或者瓶中【zhōng】。
细胞【bāo】冻存：待细胞生长状【zhuàng】态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞【bāo】冻存时【shí】，弃去培养基后加【jiā】入【rù】少量胰酶，细胞变【biàn】圆脱【tuō】落后，加入【rù】约lml含血清的培养基后加【jiā】入冻存管中，再添【tiān】加【jiā】1〇%DMSO后进行冻【dòng】存【cún】。
 
注意事项：
收到细【xì】胞后【hòu】，若发现【xiàn】干冰己挥发【fā】干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有【yǒu】污染，请立即【jí】与我们电联【lián】。
所有动物【wù】细胞均视为【wéi】有潜在的生【shēng】物危害性，必须在二【èr】级【jí】生物安全台内【nèi】操作，并【bìng】请注意防护，所有【yǒu】废【fèi】液及接触过此细【xì】胞的器皿需要【yào】灭菌后方能【néng】丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：肝癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肝癌细胞(BEL-7402)运【yùn】输和保存：可【kě】选择干冰运输【shū】及发送【sòng】复苏存活细胞【bāo】方式：（1)干冰运输，收到【dào】后立即转入液【yè】氮冻存或【huò】直接复【fù】苏；（2)存【cún】活细胞，收【shōu】到后应【yīng】继续【xù】生长，传代达【dá】到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培【péi】养【yǎng】步骤。