小鼠黑色素瘤细胞（B16BL6）

小鼠黑色素瘤细胞(B16BL6)
细胞特性
1)来源：小鼠，皮肤
2)形态：黑色素细胞
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请【qǐng】先在显微镜【jìng】下确认细【xì】胞生长状态，去掉封口【kǒu】膜并将T25瓶【píng】置【zhì】于37°C培养约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果【guǒ】细胞长满（90%以【yǐ】上）请及【jí】时进行细胞传代【dài】，传代培养用6ml本公【gōng】司【sī】附 带【dài】的*培【péi】养基。
5.接到细胞次日，请检查细【xì】胞是【shì】否污染【rǎn】，若发现污染【rǎn】或【huò】疑似污【wū】染，请【qǐng】及时与我 们取得【dé】电联。
 
小鼠黑色素瘤细胞(B16BL6)细胞用途：仅供使用。
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】 RPIVM-1640 培养基（RPMI-1640，GIBCO)，90%;小【xiǎo】牛血【xuè】清，10%。
2.培养条【tiáo】件：气相：空气，95%;二氧化【huà】碳【tàn】，5%。温度：37°C，培养箱湿度为 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞【bāo】：将含有lmL细胞悬【xuán】液的冻【dòng】存管迅速【sù】放入37°C水浴【yù】中（水面【miàn】要低【dī】于冻存【cún】管盖部）摇晃解冻【dòng】，移【yí】入事【shì】先【xiān】准备好的含有4mL培养基的【de】15ml离心管中混合均匀。在【zài】1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清【qīng】液【yè】，加入lmL培养基后吹匀。然后【hòu】将所有【yǒu】细胞悬液移【yí】入含有5ml培养基【jī】的培养瓶中培养过夜【yè】。第二天换液并检查细胞密度。
 
细胞传代：
如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清【qīng】，用不含钙、镁离【lí】子的PBS润洗细【xì】胞9-21次。力口2m丨【shù】消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于【yú】37°C培养箱中消化9-21分钟【zhōng】，然【rán】后在【zài】显微镜【jìng】下观察【chá】细胞消化情况【kuàng】，若细胞大部【bù】分变【biàn】圆并脱【tuō】落，迅速拿回操作台，轻敲几下培【péi】养【yǎng】瓶后【hòu】加入3ml此细胞的 培养基终止消化。轻轻吹打后吸出，移入【rù】15ml离心管中【zhōng】，在1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟，弃【qì】去【qù】上清【qīng】液【yè】，加入【rù】lmL培养液后吹匀【yún】。移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养【yǎng】瓶中或【huò】含有14ml培养 基的T-75培养瓶【píng】中培养。细【xì】胞冻存：待【dài】细胞生长状【zhuàng】态良好时，可进【jìn】行细【xì】胞冻存。贴壁细胞冻【dòng】存时，先要消化处【chù】理并进【jìn】行细胞计数。消化方【fāng】法按【àn】照细胞传代方法的9-21步骤进行，后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接【jiē】计数后【hòu】离心，用【yòng】血清重悬浮【fú】，加DMSO至终浓度为10%。加【jiā】入DMSO后【hòu】迅速混匀，按每lml的数量分【fèn】配到【dào】冻存管中【zhōng】。本公司按【àn】每个冻【dòng】存管细【xì】胞数目大于1X106个细【xì】胞冻【dòng】存。
 
小鼠黑色素瘤细胞(B16BL6)注意事项：
收到细胞后，若【ruò】发现干冰己挥发干净【jìng】、冻存管瓶盖【gài】脱【tuō】落、破损【sǔn】及细胞有污【wū】染，请【qǐng】立即与【yǔ】我们电联。
所有动物细【xì】胞均视为有潜在的【de】生物危害性，必须【xū】在【zài】二级生物【wù】安【ān】全台内操作，并请注意防【fáng】护，所有【yǒu】废液【yè】及接触过此细胞的器皿需要灭菌【jun1】后方能【néng】丢【diū】弃。