小鼠皮肤黑色素瘤细胞（B16-F10）

小鼠皮肤黑色素瘤细胞(B16-F10) 
细胞特性
1)来源：皮肤
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输【shū】和保存：使用【yòng】含有胎牛血【xuè】清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常【cháng】温条件下，离心【xīn】5min后，于洁净【jìng】操作台弃去上【shàng】清，加入【rù】推荐 使【shǐ】用的培【péi】养基后【hòu】转【zhuǎn】移至【zhì】l〇cm培养【yǎng】皿或【huò】者T25培养瓶中培【péi】养，传【chuán】代达到细胞生长 状【zhuàng】态【tài】良好时，再进行冻存。具体操作【zuò】见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠皮肤黑色素瘤细胞(B16-F10)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备DMEM培【péi】养【yǎng】基(DMEM，GIBCO)，90%;北美胎牛血清 (United States，GIBCO，货号 16000-044)，10%。
2. 培【péi】养条【tiáo】件：气相【xiàng】：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏【shì】度【dù】，培养箱 湿度为70%-80%。
3.冻存【cún】液：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO,现用现配。液氮储存。
2)细胞【bāo】处理【lǐ】：复苏细【xì】胞：将含有lmL细胞悬【xuán】液的冻存管在【zài】37°C水浴中迅速摇晃解冻，加 入4mL培【péi】养基【jī】混合均【jun1】匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培【péi】养【yǎng】基后吹匀。然后将所有细【xì】胞悬液【yè】加入培养瓶【píng】中【zhōng】培养过夜【yè】（或将【jiāng】细胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二【èr】天换液并检 查【chá】细胞密度。
 
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴【tiē】壁细胞，传代可【kě】参【cān】考【kǎo】以【yǐ】下方法：弃【qì】去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。力口【kǒu】 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中【zhōng】，置于37°C培养箱【xiāng】中消化9-21分钟，然【rán】后【hòu】在显【xiǎn】微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部 分变圆并脱落，迅速拿回操作【zuò】台【tái】，轻敲几下【xià】培养【yǎng】瓶后加【jiā】少量培【péi】养【yǎng】基终止消化【huà】。按6-8ml/瓶补【bǔ】加培养基，轻【qīng】轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分 钟，弃去【qù】上清液，补加l-2mL培养液后吹匀。将细胞【bāo】悬液按1: 2到【dào】1: 5的比例分到【dào】新的含8ml培养基的【de】新皿【mǐn】中或者瓶【píng】中。
细胞冻存【cún】：待细胞生长状态良好时，可进行细【xì】胞冻存。贴壁【bì】细胞冻存时，弃 去【qù】培养【yǎng】基后加【jiā】入【rù】少【shǎo】量胰【yí】酶，细胞变圆脱落【luò】后，加【jiā】入约lml含血清的【de】培养基后【hòu】 加入冻存【cún】管中，再添加【jiā】1〇%DMSO后进行【háng】冻存。
 
小鼠皮肤黑色素瘤细胞(B16-F10)注意事项：
收到细胞后【hòu】，若发现干冰己挥发干净、冻存管【guǎn】瓶【píng】盖脱落、破损【sǔn】及细胞有污【wū】染，请立【lì】 即与我们电联【lián】。
所有【yǒu】动物细胞均视【shì】为【wéi】有潜在的【de】生物危害【hài】性，必须在二级生物安全【quán】台内操作，并请注 意【yì】防护，所有废液及接触【chù】过此【cǐ】细胞的器皿需要【yào】灭菌后【hòu】方能丢弃。