人肝癌细胞（BEL-7405）

人肝癌细胞(BEL-7405)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培【péi】养基(RPIVM-1640:GIBCO 添【tiān】加 NaHC031.5g八, D-葡萄糖【táng】2.5g八【bā】，丙酮酸钠O.llg八)，90%;胎【tāi】牛血清，10%。
2. 培【péi】养【yǎng】条件【jiàn】：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏【shì】度【dù】，培养箱湿【shī】度【dù】为70%-80%。
3.冻存液【yè】：90%*培养基，10%DMSO,现用现【xiàn】配。液氮储存。
2)细胞处理：
复【fù】苏细胞：将含有lmL细胞悬液的【de】冻存管【guǎn】在37°C水浴中迅速摇【yáo】晃解冻【dòng】，加【jiā】入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离【lí】心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养【yǎng】基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培【péi】养瓶中培【péi】养过夜（或将细胞【bāo】悬【xuán】液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养【yǎng】基，培【péi】养过夜【yè】）。第【dì】二天换液【yè】并检 查细【xì】胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人肝癌细胞(BEL-7405)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不【bú】含钙、镁离【lí】子的PBS润洗细胞9-21次。力口2m丨【shù】消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中【zhōng】，置于【yú】37°C培养【yǎng】箱中【zhōng】消化9-21分钟，然后在显微镜下观察细胞【bāo】消化情况，若细胞大部【bù】分变圆并脱落，迅速拿回操作台【tái】，轻【qīng】敲几下培养瓶【píng】后加少量培养基终【zhōng】止消化。按6-8ml/瓶补加【jiā】培【péi】养基，轻【qīng】轻【qīng】打匀后吸出，在【zài】1000RPM条件下离【lí】心4分钟，弃去上清【qīng】液，补加l-2mL培养液后吹匀【yún】。将细胞悬液【yè】按【àn】1: 2到1: 5的【de】比例分到新的【de】含8ml培养基的新【xīn】皿中【zhōng】或者瓶中。
 
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一【yī】：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液【yè】，补加l-2mL 培【péi】养液后吹匀，将【jiāng】细胞悬液按1: 2到1: 5的比例【lì】分到新的含【hán】8ml培养基【jī】的【de】 新皿中或者瓶中。
方法【fǎ】二：可选择半数换液方式【shì】，弃去半数培养基后，将剩余【yú】细胞悬起【qǐ】，将【jiāng】细 胞【bāo】悬液【yè】按1: 2到1: 3的比例分到【dào】新的含【hán】8ml培养基的新皿中或者【zhě】瓶中。
细胞【bāo】冻【dòng】存：待细胞生长状【zhuàng】态良【liáng】好时，可进【jìn】行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培【péi】养基后【hòu】加入【rù】少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约lml含血【xuè】清的【de】培养基后 加入冻存【cún】管中【zhōng】，再【zài】添加1〇%DMSO后进行冻【dòng】存。悬浮细胞【bāo】冻存时，应将细胞收【shōu】集，1000RPM条件【jiàn】下离【lí】心4分钟，少量保存上清液（防止细胞【bāo】吸走)，加入部分新鲜【xiān】培养基【jī】，加入到冻【dòng】存管中，在冻存【cún】管中加入1〇%DMSO后进【jìn】行冻存。
 
注意事项：
收到细【xì】胞【bāo】后，若发现干冰【bīng】己【jǐ】挥发干净、冻存管瓶盖【gài】脱落【luò】、破损及细胞有污染【rǎn】，请立【lì】即与我们电联。
所有动物细【xì】胞【bāo】均视为有潜在【zài】的生物危害性，必须在二级生物【wù】安全台【tái】内操作，并请注意【yì】防护【hù】，所【suǒ】有废【fèi】液及接触过此细胞【bāo】的器皿需要灭菌后方能丢弃【qì】。
 
细胞特性：
1)来源：肝癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
人肝癌细胞(BEL-7405)运输【shū】和保存【cún】：可【kě】选择干【gàn】冰运输及发送复苏存活细胞【bāo】方式：（1)干冰【bīng】运输，收到后 立即转入液氮【dàn】冻存或【huò】直接复苏；（2)存【cún】活细胞，收到后【hòu】应继【jì】续生长，传代达到细 胞生长状态良好【hǎo】时，再进行冻存。具体【tǐ】操作见【jiàn】细胞培【péi】养步骤。
细胞用途：仅供使用。
细胞用途：仅供使用。