小鼠肝癌细胞（H22）

小鼠肝癌细胞(H22)
细胞介绍
该细胞系分离自小鼠腹水，由大连医科学院建立。
 
细胞特性
1)来源：小鼠肝，肝癌
2)形态：贴壁生长
3)含量：>lxl06个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保存：使【shǐ】用含有胎牛血清的2ml冻存【cún】管【guǎn】发【fā】送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温【wēn】条件下【xià】，离心【xīn】5min后，于洁净操作台弃去【qù】上清，加入推荐使用的【de】培养基后转移至l〇cm培养皿【mǐn】或者T25培养瓶中【zhōng】培【péi】养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻【dòng】存【cún】。具体操作【zuò】见细胞培养【yǎng】步骤。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠肝癌细胞(H22)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640培【péi】养基(RPMI-1640:GIBCO)，90%;北美【měi】胎【tāi】牛【niú】血清(UnitedStates，GIBCO，货号16000-044)，10%。
2. 培养条【tiáo】件：气【qì】相：空气，95%;二氧化【huà】碳，5%。温度：37摄氏度，培【péi】养箱【xiāng】湿度为70%-80%。
3.冻存【cún】液：90%*培【péi】养基，10%DMSO,现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将【jiāng】含有lmL细胞【bāo】悬液的冻存管【guǎn】在37°C水浴【yù】中迅速摇晃【huǎng】解冻【dòng】，加入4mL培养基混【hún】合均匀。在1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟，弃【qì】去上清液，补 加l-2mL培养基后吹匀【yún】。然后将所有细【xì】胞悬液【yè】加入培养【yǎng】瓶中培养过夜【yè】（或【huò】将细胞悬液【yè】加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基【jī】，培养过夜【yè】）。第二【èr】天换液并检 查【chá】细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。
力【lì】口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消【xiāo】化9-21分钟，然【rán】后在【zài】显微镜下观察细胞消化情况，若【ruò】细胞【bāo】大部分【fèn】变圆并【bìng】脱【tuō】落【luò】，迅速拿回操作台，轻【qīng】敲几下【xià】培【péi】养瓶后加少量【liàng】培养基终止消化。
按6-8ml/瓶【píng】补加【jiā】培养基，轻轻打匀后吸【xī】出，在1000RPM条件下离心4分 钟，弃去上清【qīng】液，补加l-2mL培养【yǎng】液后【hòu】吹匀。
将细胞悬液按1: 2到1: 5的【de】比例分到【dào】新【xīn】的含8ml培养基的新皿【mǐn】中或者 瓶中。
细胞【bāo】冻存：待【dài】细【xì】胞生长状【zhuàng】态良好【hǎo】时，可【kě】进行细胞冻存。贴壁细胞冻存【cún】时，弃【qì】去培养【yǎng】基后加入少量胰酶【méi】，细胞变圆脱【tuō】落后【hòu】，加入约【yuē】lml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
小鼠肝癌细胞(H22)注意事项：
收到细胞【bāo】后，若发现干冰己挥发干净、冻存【cún】管【guǎn】瓶盖脱【tuō】落、破损及细胞有污【wū】染，请【qǐng】立【lì】即与我们电联。
所有动物细胞均视为【wéi】有潜在的生物危害性【xìng】，必须【xū】在二级生【shēng】物安【ān】全台内【nèi】操作，并【bìng】请【qǐng】注意防护，所有废液及接触过此细胞的器【qì】皿需要灭菌后方【fāng】能丢弃。