小鼠胚胎干细胞 （E14）

小鼠胚胎干细胞 (E14)
细胞特性
1)来源：小鼠，胚胎内细胞团
2)形态：球形克隆
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显微镜下确【què】认细【xì】胞生长状态，去【qù】掉封口【kǒu】膜【mó】并将T25瓶【píng】置于37°C培养约2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞【bāo】长满（90%以上）请及【jí】时进【jìn】行细【xì】胞传代，传代培养【yǎng】用6ml本公司附【fù】带的*培【péi】养基。
5.接【jiē】到细胞【bāo】次日，请检【jiǎn】查细胞是否【fǒu】污染，若发【fā】现污染或疑似污染，请及时与我们【men】取【qǔ】得电联。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠胚胎干细胞 (E14)本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.mES *培【péi】养液配方【fāng】（600 ml):DMEM (Invitrogen 12430)497ml，ES级FBS
(biochrom S4115)90ml,Glutamax(Invitrogen 35050)6ml,NEAA(Invitrogen11140)6ml，UF(MilliporeESG1107)6〇yl(终浓度为【wéi】1000U/ml)，0-Mer (Invitrogen21985)1.5ml〇
2. 培养条件：气相：空气【qì】，95%;二氧化【huà】碳，5%。温度：37°C，培养箱【xiāng】湿【shī】度 为 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复【fù】苏【sū】细胞：将含有lmL细【xì】胞悬【xuán】液的冻存管迅速【sù】放【fàng】入37°C水浴中（水面要低于冻【dòng】存管盖【gài】部）摇晃解冻，移入事【shì】先准【zhǔn】备好的含有4mL培养基的15ml离心管中【zhōng】混合均匀。在【zài】1000RPM条件下离心4分钟，弃去【qù】上【shàng】清液，加入lmL培养【yǎng】基后吹匀。然【rán】后将【jiāng】所有细胞悬【xuán】液移入含有5ml培【péi】养基【jī】的培养瓶中【zhōng】培养【yǎng】过夜。 第二天换液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。
力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱【xiāng】中消化9-21分钟，然【rán】后【hòu】在显微【wēi】镜下【xià】观察细胞消化情况，若细胞大部【bù】分变圆并【bìng】脱落，迅速拿回操【cāo】作台，轻敲几【jǐ】下培【péi】养瓶【píng】后加入3ml此细胞的【de】培养【yǎng】基终止消化。
轻轻吹打【dǎ】后【hòu】吸出，移入15ml离【lí】心【xīn】管中，在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，加入lmL培养液后吹匀。
移【yí】入到【dào】事先准备好的【de】含有5ml培养基【jī】的T-25培养瓶中【zhōng】或含有14ml培养 基的T-75培养【yǎng】瓶中培养。
 
细胞冻【dòng】存：待细胞生长【zhǎng】状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻【dòng】存时，先要消【xiāo】化【huà】处理并进行细胞计数。消化【huà】方法按照细胞传代方法的【de】9-21步骤进【jìn】行，后【hòu】的重悬【xuán】液【yè】使用血清。悬浮【fú】细【xì】胞直接计数【shù】后离心，用血【xuè】清重【chóng】悬浮，加DMSO至终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每lml的数量分【fèn】配到【dào】冻存管 中。本公司按【àn】每个【gè】冻存管细胞数目大于1X106个细胞【bāo】冻【dòng】存。
 
小鼠胚胎干细胞 (E14)注意事项：
收到细胞后【hòu】，若发现【xiàn】干冰己挥【huī】发干净、冻存【cún】管瓶盖脱落、破损及细胞有污【wū】染， 请【qǐng】立即与我们【men】电联。
所有动物【wù】细胞均视为【wéi】有潜【qián】在【zài】的【de】生物危害【hài】性，必须【xū】在二级生物【wù】安全台内操作， 并请【qǐng】注【zhù】意防护，所有【yǒu】废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后【hòu】方能丢弃。