人肝癌细胞氟尿嘧啶耐药株（BEL/FU）

人肝癌细胞氟尿嘧啶耐药株(BEL/FU)

细胞介绍：
该细胞为氟尿嘧啶处理的人肝癌耐药细胞株。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
注意【yì】：客户【hù】收到细胞后按照【zhào】下面的要求操作：培养瓶里面的培养液是不含药【yào】物的。待细胞长【zhǎng】到9-21%的汇合度时，去【qù】掉培养液，加入含8000ng/mlFU药物的【de】培养液，放入培养箱，这段时间【jiān】肯【kěn】定会【huì】有小【xiǎo】部【bù】分细胞悬浮起【qǐ】来，但是【shì】不要紧，通过换液可以去掉，下面的细胞【bāo】待【dài】长【zhǎng】满就【jiù】可以消化传瓶了，这时可以一【yī】直用含 药培养液来消化培养【yǎng】细【xì】胞，一两【liǎng】代之【zhī】后【hòu】可以将药物浓【nóng】度提髙15000ng/ml，含药 培【péi】养液用于细胞培养都【dōu】没问【wèn】题【tí】的，冻存的时候就不要在冻存液里面加药物了。
1.准备 RPIVM-1640 培养基(RPMI-1640:GIBCO,添加 NaHC031.5g八,D-葡萄糖2.5g八，丙【bǐng】酮酸钠O.llg八)，90%;胎牛血清，10%，添加1%双【shuāng】抗，20000ng/ml氟【fú】尿喃【nán】啶【dìng】。
2.培养【yǎng】条件：气相：空气【qì】，95%;二氧化【huà】碳【tàn】，5%。温度：37摄氏度【dù】，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现【xiàn】用现配。液【yè】氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞【bāo】：将含有【yǒu】lmL细胞悬液的冻存管在【zài】37°C水浴【yù】中迅速摇【yáo】晃解冻，加入4mL培养【yǎng】基混合均匀。在1000RPM条件下离【lí】心4分钟，弃【qì】去上清液【yè】，补【bǔ】加l-2mL培养【yǎng】基后吹匀【yún】。然后将所有细胞悬液【yè】加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿【mǐn】中，加入约8ml培养基【jī】，培养过【guò】夜）。第二【èr】天换液【yè】并【bìng】检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人肝癌细胞氟尿嘧啶耐药株(BEL/FU)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。力口2m丨消【xiāo】化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中【zhōng】，置于【yú】37°C培养箱中消化9-21分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细【xì】胞大部【bù】 分【fèn】变圆【yuán】并【bìng】脱【tuō】落，迅速拿回操作【zuò】台，轻敲几下培养瓶后加少量培养【yǎng】基终【zhōng】止消化【huà】。按6-8ml/瓶补加培养基【jī】，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清【qīng】液【yè】，补加l-2mL培养液后吹匀【yún】。将细胞【bāo】悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养【yǎng】基的新【xīn】皿中或【huò】者瓶中【zhōng】。
细胞冻存：待【dài】细胞生长状态【tài】良好时【shí】，可进【jìn】行【háng】细胞冻存。贴【tiē】壁细胞【bāo】冻存时，弃去培养基后加【jiā】入少量胰【yí】酶，细【xì】胞变圆脱落后【hòu】，加入约lml含血【xuè】清的培养基【jī】后 加入【rù】冻存管中，再添加1〇%DMSO后【hòu】进行冻存。
 
注意事项：
收【shōu】到细胞后，若发现干冰已【yǐ】挥发【fā】干净、冻存管瓶盖脱落【luò】、破损及细胞【bāo】有污染【rǎn】，请立即与我【wǒ】们电联。
所有动物细胞【bāo】均视为有潜在的生【shēng】物危害性，必须在二级生物安全台【tái】内操作，并请注【zhù】意防【fáng】护，所有废液【yè】及接【jiē】触过此【cǐ】细胞【bāo】的器皿需要灭【miè】菌后方能【néng】丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：肝癌细胞
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装

人肝癌细胞氟尿嘧啶耐药株(BEL/FU)运输和保存：使用含有【yǒu】胎牛血清【qīng】的2ml冻存管发送存【cún】活细胞。收到【dào】细【xì】胞后，可【kě】在1000RPM，常温条【tiáo】件下，离心5min后，于洁净操作台【tái】弃【qì】去【qù】上【shàng】清，加入推荐使用的培【péi】养基后转【zhuǎn】移至l〇cm培养皿或者T25培养【yǎng】瓶【píng】中培养，传代达到细胞生长状【zhuàng】态良好时，再进【jìn】行冻存。具体操【cāo】作见细【xì】胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。