人结直肠腺癌细胞（Caco-2）

人结直肠腺癌细胞(Caco-2)
细胞介绍：
这株细胞【bāo】分离自【zì】直【zhí】肠【cháng】原位【wèi】癌。当长到满【mǎn】时【shí】，细胞表现出特征【zhēng】性的肠上皮【pí】细胞分化。Caco-2细胞表达维甲【jiǎ】酸【suān】结合蛋【dàn】白I和维甲酸结合蛋白II，并呈角质【zhì】蛋白阳性。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1. 准备MEM培【péi】养基（GIBCO,，80%;胎牛血【xuè】清，20%。
2. 培养【yǎng】条【tiáo】件：气相：空气，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温【wēn】度【dù】：37摄氏度，培养箱 湿【shī】度为70%-80%。
3. 冻存液【yè】：90%*培养基，10%DMSO,现【xiàn】用【yòng】现配。液氮储存【cún】。
 
2)细胞处理：
复苏细胞【bāo】：将【jiāng】含有【yǒu】lmL细胞悬液的冻存管【guǎn】在【zài】37°C水【shuǐ】浴中迅速【sù】摇晃【huǎng】解冻，加入4mL培养基混合均【jun1】匀。在1000RPM条件下【xià】离【lí】心4分钟，弃去上清【qīng】液【yè】，补加l-2mL培养基【jī】后吹【chuī】匀。然后将所【suǒ】有细胞悬液【yè】加入培养瓶中培养过夜（或将【jiāng】细胞悬液加入l〇cm皿中【zhōng】，加入约8ml培养基，培【péi】养过夜）。第二天换液并检查【chá】细胞【bāo】密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人结直肠腺癌细胞(Caco-2)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用【yòng】不含钙、镁离子的PBS润洗【xǐ】细胞9-21次。力口2m丨【shù】消【xiāo】化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中【zhōng】，置于37°C培养箱中消化【huà】9-21分钟，然【rán】后在显微【wēi】镜下观察细胞消化情况，若细胞大【dà】部分变【biàn】圆并脱落，迅速拿回【huí】操作台，轻敲【qiāo】几下培养【yǎng】瓶后【hòu】加【jiā】少量培养基【jī】终【zhōng】止【zhǐ】消化。按6-8ml/瓶【píng】补加培【péi】养基，轻轻【qīng】打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去【qù】上【shàng】清液，补加l-2mL培养液后吹匀。
 
细胞冻存：待细胞【bāo】生【shēng】长状态良【liáng】好时，可进行【háng】细胞冻存。贴壁细胞冻存时【shí】，弃 去培养【yǎng】基【jī】后加入【rù】少量胰酶，细胞变圆脱【tuō】落后，加入约lml含【hán】血清的培养基后加【jiā】入冻存管【guǎn】中，再【zài】添加1〇%DMSO后进行冻存【cún】。
 
注意事项：
收到【dào】细胞后，若发现【xiàn】干冰己挥【huī】发干净【jìng】、冻存管瓶【píng】盖脱落、破损及【jí】细胞【bāo】有污染，请立【lì】即与我们电联。
所有动【dòng】物细胞【bāo】均视为有潜在的【de】生物【wù】危【wēi】害性，必须在二级生物【wù】安全台内操【cāo】作，并请注意【yì】防护，所有废【fèi】液及接触【chù】过此细胞的【de】器皿需要灭【miè】菌后方能丢弃瓶中。
 
细胞特性：
1)来源：结肠，结直肠腺癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人结直肠腺癌细胞(Caco-2)运输和保存：可【kě】选择干冰运输及【jí】发送复苏【sū】存【cún】活细胞方【fāng】式：（1)干冰运输，收到【dào】后【hòu】 立即转入液【yè】氮冻【dòng】存或直【zhí】接复苏；（2)存活细【xì】胞，收到后应继续【xù】生长，传代达到【dào】细胞生长状态【tài】良好时，再进行【háng】冻存。具【jù】体操作见【jiàn】细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。