人肺腺癌 （Calu-3）

人肺腺癌 (Calu-3)
细胞介绍：
该患【huàn】者为25岁白人【rén】男性，已经用环磷酰胺、争光【guāng】霉素、阿【ā】霉素进行过治疗。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 MEM 培养基(MEM, GIBCO，，添加 NaHC031.5g八，丙酮酸钠O.llg八)；胎牛血清，10%。
2. 培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄【shè】氏【shì】度，培【péi】养【yǎng】箱湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用【yòng】现配。液氮【dàn】储【chǔ】存。
 
2)细胞处理：
复【fù】苏细胞：将含有lmL细胞悬液的【de】冻存【cún】管在【zài】37°C水浴中【zhōng】迅【xùn】速摇晃解【jiě】冻，加入4mL培养【yǎng】基【jī】混合均匀。在【zài】1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟【zhōng】，弃去【qù】上清【qīng】液，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液【yè】加入培养【yǎng】瓶【píng】中培养过夜（或将细胞【bāo】悬液【yè】加入l〇cm皿中，加入约8ml培养【yǎng】基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度【dù】。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人肺腺癌 (Calu-3)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培【péi】养上清，用不含钙、镁离子【zǐ】的PBS润【rùn】洗细胞9-21次。力口【kǒu】2m丨消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中【zhōng】消化9-21分钟【zhōng】，然后【hòu】在显微镜【jìng】下观察细胞【bāo】消化情【qíng】况【kuàng】，若细胞大【dà】部 分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养【yǎng】瓶后加【jiā】少【shǎo】量培养基终止【zhǐ】消化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培【péi】养【yǎng】液【yè】后【hòu】吹匀。将细【xì】胞【bāo】悬液按1: 2到1: 5的比例分到【dào】新【xīn】的含8ml培养基的新皿中或者 瓶中。
 
细胞冻存【cún】：待细胞生长状【zhuàng】态良【liáng】好时，可进行细【xì】胞冻存。贴壁【bì】细【xì】胞冻存时，弃去培养基【jī】后加入少量胰酶【méi】，细胞变圆【yuán】脱落后，加入约lml含血清的培养基后加入【rù】冻存管【guǎn】中，再添【tiān】加【jiā】1〇%DMSO后进行【háng】冻存。
 
注意事项：
收到细胞后，若发【fā】现干【gàn】冰【bīng】己挥发【fā】干净【jìng】、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与【yǔ】我们电联。
所有动物细胞【bāo】均视为有潜【qián】在的生物危害性，必须在【zài】二级【jí】生物安全台内操作，并【bìng】请注意防护，所【suǒ】有废液【yè】及接触过此细胞的器皿【mǐn】需【xū】要灭菌后【hòu】方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：肺
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肺腺癌 (Calu-3)运输和保存【cún】：使用含【hán】有【yǒu】胎牛血清的【de】2ml冻存管发送存【cún】活细胞【bāo】。收到细胞后，可【kě】在1000RPM，常温条件下【xià】，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转【zhuǎn】移至【zhì】l〇cm培养皿或者T25培【péi】养瓶【píng】中培【péi】养，传代【dài】达到细胞生长 状态良好时，再进行【háng】冻存。具【jù】体操作见【jiàn】细胞培【péi】养步骤。
细胞用途：仅供使用。