鸡胚成纤维细胞（UMNSAH/DF-1）

鸡胚成纤维细胞(UMNSAH/DF-1)
细胞介绍
该细胞是起【qǐ】源于【yú】10日龄的ELL-0鸡蛋的鸡细【xì】胞株，自发永【yǒng】生化【huà】。分【fèn】离原代鸡胚成纤维细胞并在培养液中培【péi】养；传代直到衰老；在衰老过程中【zhōng】离心以保持细胞培【péi】养在30%到【dào】60%满；不衰老的克隆进行鉴定并传代不少于30次。在软琼脂上没有观【guān】察到克隆增殖，说【shuō】明【míng】这些细胞是永生化【huà】而没有转化。该细【xì】胞可【kě】作为病【bìng】毒【dú】增殖、组【zǔ】蛋白表达和重【chóng】组病毒生【shēng】产【chǎn】的基质。
 
细胞特性
1)来源：鸡胚
2)形态：成纤维细胞，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请【qǐng】先在显微镜下确认细胞生【shēng】长状态，去掉封口【kǒu】膜并【bìng】将T25瓶置【zhì】于37°C培养【yǎng】约2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞长满（90%以上）请【qǐng】及时进行细胞【bāo】传代，传代培【péi】养用6ml本【běn】公【gōng】司附【fù】带的*培【péi】养【yǎng】基。
5.接【jiē】到细【xì】胞【bāo】次日，请检【jiǎn】查细胞【bāo】是【shì】否污染，若发现【xiàn】污染或疑似污染，请及时与我们取得电【diàn】联。
 
鸡胚成纤维细胞(UMNSAH/DF-1)细胞用途：仅供使用。
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】DMEM培【péi】养基(DMEM，GIBCO)，90%;胎【tāi】牛血清，10%。
2.培养条件：气相：空气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度【dù】：37°C，培养箱湿【shī】度为 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有【yǒu】lmL细【xì】胞悬液的冻存管迅速放入【rù】37°C水浴中（水面要低于冻存【cún】管盖部）摇晃解冻，移入事先准【zhǔn】备好的含有【yǒu】4mL培养基【jī】的【de】15ml离心管中混合均匀。在【zài】1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清【qīng】液，加入lmL培
养【yǎng】基后吹匀。然后【hòu】将所有细胞悬液【yè】移入含有【yǒu】5ml培养【yǎng】基的培养瓶中培养过夜【yè】。第【dì】二天换液并检查细【xì】胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润【rùn】洗【xǐ】细胞9-21次。力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养【yǎng】瓶中，置【zhì】于37°C培养箱中消化9-21分【fèn】钟【zhōng】，然【rán】后在【zài】显微【wēi】镜下观【guān】察细胞【bāo】消化情况，若细胞大部
分变圆并脱落【luò】，迅速拿【ná】回【huí】操作【zuò】台，轻敲【qiāo】几下培养瓶后加入3ml此【cǐ】细胞的【de】培养【yǎng】基终【zhōng】止消化。轻【qīng】轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离【lí】心【xīn】4分钟，弃【qì】去上清液，加入【rù】lmL培养液后吹匀。
移入到【dào】事先准备好的【de】含有5ml培【péi】养基的T-25培养瓶【píng】中或含有14ml培养基的T-75培养瓶【píng】中培养【yǎng】。
 
细胞冻存【cún】：待细胞生长【zhǎng】状态良【liáng】好【hǎo】时【shí】，可【kě】进【jìn】行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，先要【yào】消化处理【lǐ】并【bìng】进行细胞计数。消【xiāo】化方法【fǎ】按照细胞传代方【fāng】法的9-21步骤进行，后的重悬液使【shǐ】用血清。悬浮细胞直接计数后离心，用血清重悬【xuán】浮，加DMSO
至终浓【nóng】度为10%。加【jiā】入【rù】DMSO后迅速混匀，按每lml的数量分配到冻存管【guǎn】中。本【běn】公司【sī】按每个冻存管细【xì】胞数目大【dà】于1X106个【gè】细胞冻存。
 
鸡胚成纤维细胞(UMNSAH/DF-1)注意事项：
收到细胞后【hòu】，若发现【xiàn】干冰【bīng】己挥【huī】发【fā】干【gàn】净、冻存【cún】管瓶盖脱落、破损及【jí】细胞有污染，请立即与我们电联。
所有动物【wù】细【xì】胞均【jun1】视为有潜在的【de】生物危害性，必须【xū】在二级生物安全台【tái】内【nèi】操作，并请注【zhù】意防护，所【suǒ】有废【fèi】液及接触过此【cǐ】细胞的【de】器皿需要灭菌后方能丢弃。