人尤文氏肉瘤细胞（TC-32）

人尤文氏肉瘤细胞(TC-32)
细胞特性：
1)来源：人尤文氏肉瘤
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保存：
使【shǐ】用含有胎牛【niú】血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞【bāo】后，可在1000RPM，常温条件下【xià】，离心5min后，于洁净【jìng】操作台【tái】弃【qì】去上清，加入【rù】推荐使【shǐ】用的【de】培养基后转移至【zhì】l〇cm培养皿【mǐn】或者T75培养瓶中培养，传代达到细胞生长
状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。
 
人尤文氏肉瘤细胞(TC-32)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 DMEM-H 培【péi】养基(DMEM-H，GIBCO,添加 NaHC03 1.5g/L)，90%;胎牛【niú】血【xuè】清，10%。（DMEM 液体培养基：GIBCO，11995-065)。
2.培养条件：气相：空气，95%;二氧【yǎng】化碳【tàn】，5%。温度【dù】：37摄氏度【dù】，培养箱湿【shī】度【dù】为70%-80%。
3. 冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用【yòng】现配。液【yè】氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细【xì】胞悬【xuán】液【yè】的冻存管在【zài】37°C水浴中迅速【sù】摇晃解冻，加入4mL培养基【jī】混合均匀。在1000RPM条件下离心4分【fèn】钟，弃去【qù】上清液，补【bǔ】
加l-2mL培【péi】养基后吹匀【yún】。然后将【jiāng】所有细胞悬液加入培【péi】养【yǎng】瓶中培养过夜（或将细胞悬液加【jiā】入l〇cm皿【mǐn】中，加入约8ml培养基，培养过【guò】夜）。第【dì】二天换【huàn】液并【bìng】检查细胞密度。
 
细胞传代：
如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上清，用不【bú】含【hán】钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。力【lì】口2m消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中【zhōng】消化9-21分钟，然【rán】后在显微镜【jìng】下观【guān】察细胞消【xiāo】化情况，若细胞大部【bù】
分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲【qiāo】几下培【péi】养【yǎng】瓶后【hòu】加少量培养基【jī】终止【zhǐ】消化。按6-8ml/瓶补加【jiā】培【péi】养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下【xià】离心【xīn】4分钟，弃去【qù】上清液，补加【jiā】l-2mL培养液后吹【chuī】匀。
 
细胞【bāo】冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时【shí】，弃去培养基后加入少量【liàng】胰【yí】酶，细胞变圆脱【tuō】落后，加入约【yuē】lml含血清的培【péi】养基后【hòu】加入【rù】冻【dòng】存管【guǎn】中【zhōng】，再添加【jiā】1〇%DMSO后进行冻存。
 
人尤文氏肉瘤细胞(TC-32)注意事项：
收到细胞后，若发现干冰【bīng】己【jǐ】挥发【fā】干净、冻存【cún】管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我【wǒ】们电【diàn】联。
所有动物细胞均视为有潜【qián】在的生物危害【hài】性，必须在二级生【shēng】物安全台内操作，并请注意【yì】防【fáng】护，所有废液及接触【chù】过此【cǐ】细胞的【de】器皿【mǐn】需要灭菌【jun1】后方【fāng】能丢弃。