人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）

人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)
细胞介绍：
SH-SY5Y是1970年建自骨瘤【liú】转【zhuǎn】移灶的神经【jīng】母细胞瘤SK-N-SH细胞【bāo】系【xì】经三次【cì】克【kè】隆后的亚【yà】系(SK-N-SH—SH-SY—SH-SY5—SH-SY5Y)。该细胞【bāo】显示中【zhōng】等【děng】水平的多巴胺-0 -羟基酶活性。SH-SY5Y细胞的饱和密度大于1X106细胞/cm2。
 
细胞特性
1)来源：脑神经母细胞瘤，转移部位骨髓
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保存【cún】：使用含有胎牛血清的2ml冻存管发【fā】送存活【huó】细胞。收到细【xì】胞【bāo】后，可【kě】在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净【jìng】操【cāo】作台弃去上清【qīng】，加入推【tuī】荐使用的培养【yǎng】基后转【zhuǎn】移至【zhì】l〇cm培养皿【mǐn】或【huò】者T25培养瓶【píng】中培养，传代达细胞生长瓶中。
状【zhuàng】态良【liáng】好时，再进行冻存。具体【tǐ】操作见细胞培养步【bù】骤。细胞用途【tú】：仅供使【shǐ】用。
 
人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 MEM 及【jí】 F-12 培养基(MEM:GIBCO)，45%; F-12(F-12: GIBCO)，45%;胎牛血【xuè】清，10%。
2. 培养【yǎng】条件：气相：空气，95%;二氧【yǎng】化【huà】碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3. 冻【dòng】存液：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO,现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的【de】冻存【cún】管在37°C水浴中迅速摇晃【huǎng】解冻【dòng】，加入4mL培养【yǎng】基混【hún】合【hé】均匀。在1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃去上清液【yè】，补加【jiā】l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细【xì】胞悬【xuán】液【yè】加入培养瓶中培养【yǎng】过夜（或将
细【xì】胞悬液加【jiā】入l〇cm皿中，加入约【yuē】8ml培养基，培养【yǎng】过夜）。第二天换液【yè】并检查【chá】细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙【gài】、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。力口 2m丨【shù】消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养【yǎng】瓶中，置于37°C培【péi】养箱中【zhōng】消化【huà】9-21分钟【zhōng】，然后在显微镜下观【guān】察细【xì】胞消化情【qíng】况，若细胞【bāo】大部【bù】按6-8ml/瓶补加培养基【jī】，轻轻打【dǎ】匀后吸出【chū】，在【zài】1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃去【qù】上清液，补加l-2mL培养液后吹匀。
将细胞悬液【yè】按1: 2到1: 5的比例分到新的【de】含8ml培养【yǎng】基的【de】新皿中或者细胞冻存：待细【xì】胞生长状态【tài】良好时，可进行细【xì】胞冻存。贴壁细【xì】胞【bāo】冻存时，弃去培养【yǎng】基后【hòu】加【jiā】入少量胰酶，细胞【bāo】变圆脱落后，加【jiā】入约【yuē】lml含【hán】血清【qīng】的培养基后
加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)注意事项：
收【shōu】到细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻【dòng】存管瓶盖脱【tuō】落、破损【sǔn】及细胞【bāo】有污染，请立【lì】即与我【wǒ】们电【diàn】联【lián】。所有动物细【xì】胞均视为有【yǒu】潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内【nèi】操作，并【bìng】请注意防【fáng】护，所有【yǒu】废液及接【jiē】触【chù】过此细胞的器皿需要灭菌后方【fāng】能丢弃。