人胆管癌细胞（QBC-939）

人胆管癌细胞(QBC-939)
细胞介绍：
该细胞由第三【sān】军医大学西南【nán】医院建系【xì】于1997年【nián】，细胞来源【yuán】于一位接【jiē】受了肝胆手术的肝外胆【dǎn】管癌【ái】患者。
 
细胞特性
1)来源：肝外胆管肿瘤
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保存：使用T25瓶充液发送活细胞。收到细【xì】胞后，请先【xiān】在显微镜下检查细胞生【shēng】长状态【tài】，并【bìng】将T25瓶置于培养箱约6h或过【guò】夜【yè】后，再次检【jiǎn】查细胞状态。若状态良好，可按照以下细胞【bāo】培养步骤【zhòu】进行细【xì】胞后续【xù】处理操【cāo】作。若发【fā】现可疑污染物，请及时与我【wǒ】们取得电【diàn】联【lián】。细【xì】胞用途：仅供使用【yòng】。
 
人胆管癌细胞(QBC-939)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
2.准备 RPIVM-1640 培养【yǎng】基(RPIVM-1640:GIBCO,添加 NaHC031.5g八,D-葡萄糖2.5g八，丙酮酸钠O.llg八)，90%;胎牛血清，10%。或准备DMEM培养基(GIBCO)，90%;胎牛血清，10%;双抗，1%。
3.培【péi】养条件：气相：空气，95%;二氧【yǎng】化【huà】碳，5%。温【wēn】度【dù】：37摄氏度，培养箱湿度为【wéi】70%-80%。
4.冻【dòng】存液【yè】：90%*培养基【jī】，10%DMSO,现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将【jiāng】含有【yǒu】lmL细【xì】胞悬液的冻存管在37°C水【shuǐ】浴【yù】中【zhōng】迅速【sù】摇【yáo】晃解冻【dòng】，加入4mL培【péi】养基【jī】混合均匀【yún】。在1000RPM条件下离心4分【fèn】钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基【jī】后吹匀。然后将【jiāng】所有细胞悬液【yè】加入培养瓶中培养过【guò】夜（或将细胞悬【xuán】液加入l〇cm皿中，加入【rù】约8ml培养【yǎng】基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
细胞传代【dài】：如果细胞密【mì】度达80%-90%，即可【kě】进行传【chuán】代培养。对于【yú】贴【tiē】壁细胞，传代可参【cān】考以下方法：
1.弃去【qù】培养上清，用不含钙【gài】、镁离【lí】子的【de】PBS润洗细胞9-21次。
力口【kǒu】 2m丨【shù】消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养【yǎng】瓶【píng】中，置于37°C培养箱中消化【huà】9-21分钟，然【rán】后在显微镜下观察细胞消化情【qíng】况，若【ruò】细胞大部分变圆【yuán】并脱落，迅速拿回操作台，轻【qīng】敲几【jǐ】下培【péi】养瓶后加少量培养基终止消化。
按【àn】6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸【xī】出，在1000RPM条件下离【lí】心4分钟，弃去【qù】上清液，补加l-2mL培【péi】养液后吹【chuī】匀。将细胞悬液【yè】按1: 2到1: 5的比例分【fèn】到【dào】新的【de】含8ml培养基的【de】新【xīn】皿【mǐn】中【zhōng】或者瓶中。
 
细【xì】胞冻【dòng】存：待细胞生长状态良好时【shí】，可进行细胞【bāo】冻【dòng】存。贴【tiē】壁细胞冻存时，弃去培【péi】养基后加【jiā】入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入【rù】约【yuē】lml含血清的培养基【jī】后加入冻存管中【zhōng】，再添加1〇%DMSO后【hòu】进行冻存。
 
人胆管癌细胞(QBC-939)注意事项：
收【shōu】到细胞后【hòu】，若【ruò】发现干冰己挥发干净、冻【dòng】存管瓶盖脱落【luò】、破损及细胞【bāo】有【yǒu】污染，请立即与我们电联。
所有动物【wù】细【xì】胞均【jun1】视为【wéi】有潜【qián】在的生物危害性，必【bì】须在二级【jí】生物安全台内操作【zuò】，并请注意防【fáng】护，所有废【fèi】液及接触过此【cǐ】细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。