人非小细胞肺癌 细胞（NCI-H1299）

人非小细胞肺癌 细胞(NCI-H1299)
细胞介绍：
这株细【xì】胞来源于一【yī】个淋巴结转移患【huàn】者。细胞【bāo】均一性【xìng】的【de】部分缺【quē】失【shī】P53蛋【dàn】白，并缺少p53蛋白【bái】表达。细【xì】胞可以合成O.lpmol/毫克蛋白的NMB蛋白，而不【bú】合成促胃液释放肽(GRP)。
 
细胞特性
1)来源：肺癌；非小细胞肺癌；转移灶；淋巴结
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先【xiān】在显【xiǎn】微镜下确认细胞生长状态【tài】，去掉封口膜【mó】并将T25瓶置【zhì】于37°C培养【yǎng】约2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4. 如果细胞长满（90%以上）请及【jí】时【shí】进行细【xì】胞传代，传代培养用6ml本【běn】公【gōng】司附带【dài】的【de】*培养基【jī】。
5.接到细胞次【cì】日，请检【jiǎn】查细胞是否污染，若发【fā】现污【wū】染或【huò】疑似污染，请及【jí】时【shí】与我们取得电联。
 
细胞用途：仅供使用。
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培【péi】养【yǎng】基(RPMI-1640:GIBCO)，90%;胎牛血【xuè】清，10%。
2. 培养条件【jiàn】：气相：空气，95%;二氧化【huà】碳，5%。温度：37°C，培【péi】养箱湿度为 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管迅【xùn】速放【fàng】入37°C水【shuǐ】浴中（水面要低于冻【dòng】存【cún】管【guǎn】盖【gài】部）摇晃解冻，移【yí】入事先准备好的含有4mL培养基【jī】的15ml离心管中混合均【jun1】匀【yún】。在【zài】1000RPM条件【jiàn】下【xià】离心4分【fèn】钟【zhōng】，弃【qì】去【qù】上清液，加【jiā】入lmL培养基【jī】后吹【chuī】匀。然后将所有细胞悬液【yè】移入含有5ml培【péi】养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
 
人非小细胞肺癌 细胞(NCI-H1299)细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子【zǐ】的PBS润洗细胞【bāo】9-22次。力【lì】口 2m丨【shù】消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于37°C培【péi】养箱中消化9-22分钟，然后在【zài】显【xiǎn】微镜【jìng】下观察细胞【bāo】消化情况，若细胞【bāo】大部分变圆并脱落，迅速【sù】拿回操作台，轻【qīng】敲【qiāo】几【jǐ】下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基【jī】终止【zhǐ】消化。
轻轻吹【chuī】打后吸出，移入【rù】15ml离心管中，在1000RPM条件【jiàn】下离心【xīn】4分钟，弃去上【shàng】清【qīng】液，加入lmL培养【yǎng】液后吹匀。移入到【dào】事先准备好的含有5ml培养基【jī】的T-25培养瓶中或含有14ml培【péi】养
基的T-75培养瓶中培养。
 
细胞冻存：待细【xì】胞生长状【zhuàng】态良好时，可【kě】进行细胞【bāo】冻【dòng】存。贴壁细胞【bāo】冻存时【shí】，先要消化处理并【bìng】进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的9-22步骤进行，后的重悬液使【shǐ】用【yòng】血【xuè】清【qīng】。悬浮细胞直接计数后离心，用血清重【chóng】悬浮【fú】，加DMSO至终浓度为10%。加入DMSO后迅【xùn】速【sù】混匀【yún】，按每lml的数量分配到冻【dòng】存【cún】管【guǎn】中。本【běn】公司按每个冻存【cún】管细【xì】胞数目大于1X106个细【xì】胞【bāo】冻存。
 
人非小细胞肺癌 细胞(NCI-H1299)注意事项：
收到细胞后，若发【fā】现干冰【bīng】己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细【xì】胞有【yǒu】污染，请立即【jí】与我【wǒ】们电联。
所有动物细【xì】胞【bāo】均视【shì】为【wéi】有潜在的生物危害【hài】性，必须在二级生物安【ān】全台内操作，并请注意防护，所有废【fèi】液及接触过此细胞的器【qì】皿需【xū】要灭菌后方能丢弃【qì】。