人非小细胞 肺癌细胞（NCI-H526）

人非小细胞 肺癌细胞(NCI-H526)
细胞介绍：
该细胞来源【yuán】于高加索白人男性，提【tí】取于病人【rén】在接受治疗前【qián】的骨髓转移。
 
细胞特性：
1)来源：骨髓转移
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输【shū】和保存：使用含有胎牛血清的2ml冻存管【guǎn】发【fā】送存活细胞。收到【dào】细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离【lí】心【xīn】5min后【hòu】，于洁净操【cāo】作台弃去上清，加入推荐【jiàn】使用的培养基后【hòu】转移至l〇cm培养皿或者T25培养瓶中培【péi】养，传【chuán】代【dài】达细胞生长状【zhuàng】态【tài】良好时【shí】，再进行冻【dòng】存。具体操作见细胞【bāo】培养【yǎng】步【bù】骤。
细胞用途：仅供使用。

人非小细胞 肺癌细胞(NCI-H526)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备 RPIVM-1640 培【péi】养【yǎng】基(RPIVM-1640:GIBCO,添加 NaHC031.5g八,D-葡萄糖2.5g八，丙酮酸钠O.llg八)，90%;胎牛血【xuè】清【qīng】，10%。
2. 培养条件：气相：空气，95%;二氧【yǎng】化碳，5%。温度【dù】：37摄氏度【dù】，培养【yǎng】箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用现配。液氮【dàn】储存。
2)细胞处理：
复苏【sū】细【xì】胞：将【jiāng】含有lmL细胞悬液的【de】冻存管【guǎn】在37°C水浴中【zhōng】迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均【jun1】匀。在1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃去上清液，补【bǔ】加【jiā】l-2mL培养基后吹匀。然后将【jiāng】所有细胞悬液【yè】加入【rù】培养【yǎng】瓶中培养过【guò】夜【yè】（或将细胞悬液加【jiā】入l〇cm皿【mǐn】中，加入约8ml培【péi】养基，培【péi】养过夜）。第二天换【huàn】液并检查细胞密【mì】度。
 
细【xì】胞【bāo】传代：如果细【xì】胞密度达【dá】80%-90%，即【jí】可进【jìn】行传代培养。对于贴壁细【xì】胞【bāo】，传代可参考以【yǐ】下方法【fǎ】：弃去培养上清，用【yòng】不含钙、镁【měi】离子的PBS润【rùn】洗细胞9-22次力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中【zhōng】，置于37°C培【péi】养箱中消【xiāo】化9-22分【fèn】钟，然后【hòu】在显【xiǎn】微镜下观察细胞消化【huà】情况，若细胞大【dà】部分变圆并【bìng】脱落，迅速拿回操作台，轻敲几【jǐ】下培养瓶【píng】后加少【shǎo】量培养基终止消化【huà】。按6-8ml/瓶补加培养基，轻【qīng】轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离【lí】心4分【fèn】钟，弃去上清液，补加l-2mL培养液后【hòu】吹匀。将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分【fèn】到【dào】新【xīn】的含8ml培养【yǎng】基的新皿中【zhōng】或者瓶中。
 
细胞冻存：待细胞生长状态【tài】良好时，可进行细胞冻【dòng】存。贴【tiē】壁细胞【bāo】冻存时，弃去培养基【jī】后加【jiā】入少【shǎo】量胰酶【méi】，细胞变【biàn】圆脱落后，加入约【yuē】lml含血清的【de】培养基后加入冻存管中，再添加【jiā】1〇%DMSO后【hòu】进行冻存【cún】。
 
人非小细胞 肺癌细胞(NCI-H526)注意事项：
收【shōu】到细胞后，若发现干冰己挥【huī】发干净、冻存管瓶【píng】盖脱落、破【pò】损及细【xì】胞【bāo】有【yǒu】污染，请立即与我们电联。
所有动物细【xì】胞均视为有潜在的生物危【wēi】害性，必须在二级生物安全【quán】台内操作，并【bìng】请【qǐng】注意防【fáng】护【hù】，所有废【fèi】液及接触【chù】过此细胞的器皿需要灭菌【jun1】后方【fāng】能丢弃。