人大细胞肺癌细胞（NCI-H460）

人大细胞肺癌细胞(NCI-H460)
细胞介绍：
该细【xì】胞1982年由A.F. Gazdar建系，源自一位患【huàn】有大细胞肺癌的男性的胸【xiōng】腔积【jī】液。该细胞角蛋白、波形蛋【dàn】白【bái】阳性。
 
细胞特性
1)来源：肺癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或【huò】者lmL冻存管包装运输和保存：使用含有【yǒu】胎牛【niú】血【xuè】清的2ml冻存【cún】管发【fā】送存活【huó】细胞。收到细【xì】胞后【hòu】，可在【zài】1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入【rù】推荐使用的培养基后转移至l〇cm培养皿或者T25培【péi】养【yǎng】瓶中培养，传代【dài】达【dá】到细【xì】胞生长状态【tài】良好【hǎo】时【shí】，再进【jìn】行冻存。具体操作见【jiàn】细胞培养【yǎng】步【bù】骤【zhòu】。
 
细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基(RPIVM-1640:GIBCO, 添【tiān】加【jiā】 NaHC031.5g八,D-葡萄糖2.5g八，丙酮酸【suān】钠O.llg八【bā】)，90%;胎牛血清【qīng】，10%。
2. 培养条件【jiàn】：气相【xiàng】：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度【dù】为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用现配【pèi】。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将含【hán】有lmL细胞悬液的冻存管【guǎn】在37°C水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养【yǎng】基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃【qì】去【qù】上清【qīng】液，补加l-2mL培养基后吹匀。然【rán】后将所有细胞悬【xuán】液加【jiā】入【rù】培【péi】养瓶【píng】中培【péi】养过夜（或将细【xì】胞悬液加【jiā】入l〇cm皿【mǐn】中，加入约【yuē】8ml培【péi】养基，培养过【guò】夜）。第二天换【huàn】液并检查细胞密度。细胞【bāo】传【chuán】代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传【chuán】代培养。
 
人大细胞肺癌细胞(NCI-H460)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁【měi】离子的PBS润【rùn】洗细胞9-22次。力口 2m丨【shù】消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中【zhōng】消化【huà】9-22分钟，然后【hòu】在显微镜下【xià】观【guān】察细胞消化情况【kuàng】，若【ruò】细【xì】胞大部分变圆并脱【tuō】落，迅速拿操作【zuò】台，轻敲几下【xià】培养瓶后加少量培养基【jī】终止消化。
按6-8ml/瓶补加培养基，轻【qīng】轻打匀【yún】后吸出，在【zài】1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养液后【hòu】吹【chuī】匀，将细胞悬液按1: 2到1: 5的比【bǐ】例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶【píng】中。
 
细胞【bāo】冻存：待细胞【bāo】生【shēng】长状态【tài】良好时【shí】，可进行细胞冻存。贴壁细胞【bāo】冻存【cún】时，弃去【qù】培养基后加入少量【liàng】胰酶，细胞【bāo】变圆【yuán】脱落后，加入约lml含血清的培养基后
加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
人大细胞肺癌细胞(NCI-H460)注意事项：
收到细胞后【hòu】，若【ruò】发【fā】现干冰己挥【huī】发干净、冻【dòng】存【cún】管瓶盖脱落、破【pò】损及细胞有污染，请立【lì】即与我们电联。
所有动物【wù】细【xì】胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操【cāo】作【zuò】，并请注意防护，所有【yǒu】废液【yè】及接触【chù】过此细胞的器皿需要灭【miè】菌【jun1】后方能【néng】丢【diū】弃。