人小细胞肺癌细胞（NCI-H446）

人小细胞肺癌细胞(NCI-H446)
细胞介绍：
NCI-H446细胞【bāo】株从一【yī】位小细胞肺癌【ái】患者的胸水中建立。细胞的【de】原始【shǐ】形态【tài】并不具有【yǒu】小细胞肺癌特征。这个细胞【bāo】株是小细胞肺癌的生【shēng】化和形态【tài】学上的【de】变种，表达神经元*的烯醇酶和脑【nǎo】部肌酸激【jī】酶【méi】同【tóng】功酶。左旋多巴脱羧【suō】酶、蚕素、抗利【lì】尿激【jī】素、催产素或胃泌【mì】激素【sù】释放【fàng】肽未达到可检测水平。C-myc DNA序列扩增约20倍，c-mycRNA比正常【cháng】细胞增加15倍【bèi】。初【chū】传代培【péi】养基【jī】用添加【jiā】0.005mg/ml胰岛素,0.01 mg/ml铁传递蛋白【bái】，10 nM 17-beta-雌二醇【chún】, 胎牛【niú】血清,5%。
 
细胞特性
1)来源：肺；转移灶：肋膜渗出癌；小细胞肺癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
运输和保【bǎo】存：使用含有胎牛血清的2ml冻存管【guǎn】发送存【cún】活细胞。收到细【xì】胞后，可在【zài】1000RPM，常【cháng】温条【tiáo】件下【xià】，离心【xīn】5min后，于洁净操作【zuò】台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至l〇cm培【péi】养皿【mǐn】或【huò】者T25培【péi】养瓶中培养，传【chuán】代达到【dào】细胞生长状态良【liáng】好时，再进行冻【dòng】存。具体【tǐ】操作见细胞培养步【bù】骤【zhòu】。
 
人小细胞肺癌细胞(NCI-H446)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备 RPIVM-1640 培养【yǎng】基【jī】(RPMI-1640:GIBCO)，90%;北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号 16000-044)，10%。
2. 培【péi】养条件：气相：空气，95%;二氧【yǎng】化碳，5%。温度【dù】：37摄氏度【dù】，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用现【xiàn】配。液【yè】氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻【dòng】存管在37°C水【shuǐ】浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混【hún】合均匀。在1000RPM条【tiáo】件【jiàn】下【xià】离【lí】心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后吹【chuī】匀【yún】。然后【hòu】将所有细胞【bāo】悬【xuán】液加【jiā】入培养瓶中培【péi】养过夜（或【huò】将细胞悬液【yè】加入l〇cm皿中，加入约8ml培养【yǎng】基，培养过夜）。第二天换【huàn】液【yè】并检查细【xì】胞【bāo】密度。
 
细胞传代【dài】：如果细胞【bāo】密度达80%-90%，即可进行【háng】传代培养【yǎng】。对于贴壁细【xì】胞【bāo】，传【chuán】代可参考以下方法【fǎ】：弃去培养上清，用不【bú】含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-22次【cì】。
力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养瓶【píng】中【zhōng】，置于37°C培养箱中消【xiāo】化【huà】9-22分钟，然后在显【xiǎn】微镜下观察【chá】细胞消化情【qíng】况，若细胞大部分【fèn】变圆并脱落，迅速拿【ná】回操作台，轻敲几下培养【yǎng】瓶后加少量培养【yǎng】基终止消化。
按【àn】6-8ml/瓶【píng】补加【jiā】培养【yǎng】基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，补加l-2mL培养液后【hòu】吹匀。将细胞悬液按1: 2到1: 5的比【bǐ】例分到【dào】新的含【hán】8ml培养基的新皿中或者瓶中【zhōng】。
 
细胞冻存：待细【xì】胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴【tiē】壁细【xì】胞冻存【cún】时，弃去培养基后加【jiā】入【rù】少量【liàng】胰酶，细胞变圆脱【tuō】落【luò】后【hòu】，加入【rù】约lml含【hán】血清的培养基后加入冻【dòng】存管中，再添加【jiā】1〇%DMSO后进行冻【dòng】存。
 
人小细胞肺癌细胞(NCI-H446)注意事项：
收到细胞后【hòu】，若发现干冰己挥发干净、冻存【cún】管瓶盖脱落、破损【sǔn】及细胞有污染，请立【lì】即【jí】与我们【men】电联。
所有动物【wù】细【xì】胞【bāo】均【jun1】视为有潜在【zài】的生【shēng】物危害【hài】性，必须在二级生物安全台内【nèi】操【cāo】作，并【bìng】请注意防护，所有废液及接触【chù】过此【cǐ】细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。