人非小细胞肺癌细胞（NCI-H358）

人非小细胞肺癌细胞(NCI-H358)
细胞介绍：
1981年从一位【wèi】开始化疗之前【qián】的患者的肿【zhǒng】瘤组【zǔ】织中分离建株。超微结构研究表明细胞质中【zhōng】有【yǒu】Clara细胞【bāo】的特【tè】征结构。细胞表达主要的肺表面结合蛋白【bái】SP-A的蛋【dàn】白和RNA，不表达SP-B和【hé】SP-C。
 
细胞特性
1)来源：细支气管及肺泡癌;非小细胞肺癌;肺;细支气管;肺泡
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
运输和保存：使用含【hán】有【yǒu】胎牛血清的2ml冻存【cún】管【guǎn】发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常【cháng】温【wēn】条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去【qù】上清【qīng】，加入推荐【jiàn】使用的培养基后转移至l〇cm培养皿或者【zhě】T25培养瓶中【zhōng】培【péi】养，传代【dài】达到细【xì】胞生长【zhǎng】状态良好时，再进行冻存。具体操作见【jiàn】细【xì】胞培养步骤。
 
人非小细胞肺癌细胞(NCI-H358)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备【bèi】 RPIVM-1640 培养基(RPMI-1640:GIBCO,)，90%;胎【tāi】牛血清，10%。
2. 培养条件：气相：空【kōng】气【qì】，95%;二氧化碳，5%。温度【dù】：37摄氏度【dù】，培养【yǎng】箱湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻存【cún】液：90%*培【péi】养【yǎng】基，10%DMSO,现用现配。液氮储存【cún】。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的【de】冻存管在【zài】37°C水浴中迅速摇晃解冻，加入【rù】4mL培养基混合【hé】均匀。在1000RPM条件下离【lí】心4分【fèn】钟，弃去上清液，补加l-2mL培【péi】养基后【hòu】吹匀。然后【hòu】将所【suǒ】有细胞悬液【yè】加入培养瓶【píng】中培养过夜【yè】（或将
细胞悬【xuán】液加入【rù】l〇cm皿【mǐn】中【zhōng】，加入约8ml培养基【jī】，培养过夜）。第【dì】二天换【huàn】液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上清，用不含钙、镁【měi】离子的【de】PBS润洗【xǐ】细胞9-21次。力口 2m丨【shù】消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-21分钟，然后在【zài】显微镜【jìng】下观察细【xì】胞消化情况，若细胞大【dà】部分【fèn】变【biàn】圆并脱落，迅速拿操作台【tái】，轻敲几下培养瓶后加【jiā】少量培【péi】养【yǎng】基终【zhōng】止消化。
按6-8ml/瓶补加培养基【jī】，轻轻打匀后【hòu】吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养液后【hòu】吹【chuī】匀。将细胞悬液按【àn】1: 2到【dào】1: 5的比例分到新的含8ml培养基【jī】的【de】新皿中【zhōng】或者瓶中【zhōng】。细胞冻存：待细胞生长【zhǎng】状态良好【hǎo】时，可进行细胞冻存。贴壁【bì】细【xì】胞冻存时，弃【qì】去培养基后【hòu】加【jiā】入少量胰酶，细胞【bāo】变圆【yuán】脱落后，加入【rù】约lml含血清【qīng】的培养基【jī】后加【jiā】入【rù】冻存管中，再添加【jiā】1〇%DMSO后进行冻存【cún】。
 
人非小细胞肺癌细胞(NCI-H358)注意事项：
收【shōu】到细胞后，若发【fā】现干【gàn】冰【bīng】己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及【jí】细胞有污染，请【qǐng】立即【jí】与我【wǒ】们电联。
所有动【dòng】物细胞均视为有【yǒu】潜在的生物危害性，必须【xū】在二【èr】级生物安全台内操【cāo】作，并【bìng】请注意【yì】防护，所有废液及接【jiē】触过此细胞的器皿需要灭【miè】菌【jun1】后方【fāng】能丢弃。