人恶性黑色素瘤细胞（MeWo）

人恶性黑色素瘤细胞(MeWo)
细胞特性
1)来源：黑色素瘤
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保存：使用【yòng】含有胎牛【niú】血【xuè】清的2ml冻存管【guǎn】发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条【tiáo】件下，离心5min后，于【yú】洁净操作台弃去【qù】上清【qīng】，加入推荐使用的培养基【jī】后转【zhuǎn】移【yí】至l〇cm培养皿【mǐn】或者T25培养瓶中培养【yǎng】，传代达到细【xì】胞生长状态良好【hǎo】时【shí】，再进行【háng】冻存。具体操作见细胞培养步骤。
 
人恶性黑色素瘤细胞(MeWo)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基【jī】(RPIVM-1640:GIBCO,添加【jiā】 NaHC031.5g八,D-葡萄糖2.5g八，丙【bǐng】酮酸钠O.llg八)，90%;胎牛血清【qīng】，10%。
2. 培养条件：气相：空【kōng】气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度【dù】为【wéi】70%-80%。
3.冻存【cún】液：90%*培养基，10%DMSO,现【xiàn】用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细【xì】胞：将含【hán】有lmL细胞悬液【yè】的【de】冻存管在【zài】37°C水【shuǐ】浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基【jī】混合均匀。在1000RPM条件下离心【xīn】4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后吹【chuī】匀。然后将所有细胞悬液加入培【péi】养瓶中【zhōng】培养【yǎng】过夜（或将【jiāng】
细【xì】胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养【yǎng】基，培【péi】养过夜）。第【dì】二天【tiān】换液【yè】并检查细胞密度。
 
细胞传代：如果细胞密度【dù】达80%-90%，即可进【jìn】行传代培养。对于【yú】贴壁细胞，传代【dài】可【kě】参考以下方法：弃去【qù】培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次【cì】。力口【kǒu】 2m丨消【xiāo】化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中【zhōng】，置【zhì】于37°C培养箱中消化9-21分钟，然后【hòu】在显微【wēi】镜下观察细胞消化【huà】情况，若【ruò】细【xì】胞大部【bù】分变圆并脱落，迅【xùn】速拿回【huí】操作台，轻敲几下培养【yǎng】瓶后【hòu】加少量【liàng】培养基终止消化。
按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻【qīng】打匀后吸出，在1000RPM条件下【xià】离【lí】心【xīn】4分钟，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培【péi】养液后【hòu】吹匀。
将【jiāng】细胞悬【xuán】液【yè】按1: 2到1: 5的比例【lì】分【fèn】到新的含【hán】8ml培【péi】养基的新皿中或者细胞冻【dòng】存：待细胞生长状态良好时，可进【jìn】行细胞冻【dòng】存。贴壁细胞冻存【cún】时，弃【qì】去【qù】培养【yǎng】基后【hòu】加入少量胰酶【méi】，细胞变圆脱落后【hòu】，加入约lml含血清的培养基后加【jiā】入存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
人恶性黑色素瘤细胞(MeWo)注意事项：
收到【dào】细【xì】胞后，若发现干冰己挥发【fā】干净、冻存管瓶盖【gài】脱落、破损及细【xì】胞有污染，请立即【jí】与我们电联【lián】。
所【suǒ】有【yǒu】动物细胞均视为有潜在【zài】的生物危害性，必【bì】须在【zài】二级生物安全台内操作，并请注【zhù】意防【fáng】护，所有废液及接触过此细胞【bāo】的器皿需要灭菌后【hòu】方【fāng】能【néng】丢弃。