犬肾细胞系/ 野生型（MDCK）

犬肾细胞系/ 野生型(MDCK)
细胞介绍：
该【gāi】细【xì】胞系源自【zì】一只雌性英国可卡犬的肾脏【zāng】组【zǔ】织【zhī】，由S.H. Madinand N.B. Darby于1958年建立。该细胞【bāo】为角【jiǎo】蛋白阳性细胞。
 
细胞特性：
1)来源：狗肾
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请【qǐng】先【xiān】在显微镜下确认细胞生【shēng】长状【zhuàng】态，去掉封口膜【mó】并将T25瓶置于37°C培养约2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如【rú】果细胞【bāo】长满（90%以上【shàng】）请及时进行细胞传代，传代培养用6ml本公【gōng】司附【fù】带的*培养基。
5.接到细胞次日，请检查细【xì】胞是【shì】否污染【rǎn】，若【ruò】发现【xiàn】污【wū】染【rǎn】或疑似污染，请及时与我们【men】取得电联。
 
犬肾细胞系/ 野生型(MDCK)细胞用途：仅供使用。
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】MEM a培养【yǎng】基(MEM a，GIBCO)，90%;胎牛血清，10%。
2.培【péi】养条件【jiàn】：气相：空气，95%;二【èr】氧化【huà】碳【tàn】，5%。温度：37°C，培养箱湿度为 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞【bāo】：将含【hán】有lmL细胞【bāo】悬液【yè】的冻【dòng】存管迅速放入【rù】37°C水浴中（水面要低【dī】于【yú】冻存管盖部）摇晃解冻【dòng】，移入事先准备好【hǎo】的含有【yǒu】4mL培养【yǎng】基【jī】的【de】15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟，弃去上清液，加【jiā】入lmL培养基【jī】后吹匀【yún】。然后将所有【yǒu】细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液【yè】并检【jiǎn】查【chá】细胞密度。细胞【bāo】传代：如果细【xì】胞密度达80%-90%，即可进行传代【dài】培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去培【péi】养上清，用不含钙、镁离子的PBS润【rùn】洗细胞9-21次【cì】。力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-21分钟，然后在【zài】显微镜下观察细胞消【xiāo】化情【qíng】况，若细【xì】胞大部分变【biàn】圆并脱落，迅速拿回操作台，轻【qīng】敲几【jǐ】下培养【yǎng】瓶后加入【rù】3ml此细胞的培养基【jī】终止消化。轻【qīng】轻吹打后吸【xī】出【chū】，移入【rù】15ml离心管中，在【zài】1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃【qì】去上清液，加入【rù】lmL培养液【yè】后吹匀。
移入到事先准备好的含【hán】有5ml培养基【jī】的【de】T-25培【péi】养瓶中或含有14ml培养【yǎng】基的【de】T-75培养瓶中培养。细胞冻存：待细胞生【shēng】长状态良好时，可进行【háng】细胞冻存。贴壁细胞【bāo】冻存时，先要消化【huà】处理并进行细【xì】胞计数。消化方法【fǎ】按照细胞传代方的9-21步骤进行，后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数【shù】后离【lí】心，用血【xuè】清【qīng】重悬浮，加DMSO至终【zhōng】浓【nóng】度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按【àn】每【měi】lml的【de】数量【liàng】分【fèn】配到冻存管中【zhōng】。本公【gōng】司按每个冻存【cún】管细胞数【shù】目大于1X106个细胞【bāo】冻存【cún】。
 
犬肾细胞系/ 野生型(MDCK)注意事项：
收到细胞后，若发现【xiàn】干冰己挥发干净、冻【dòng】存管瓶【píng】盖脱落、破损及【jí】细胞【bāo】有污【wū】染，请立即【jí】与我们电【diàn】联。
所有动【dòng】物细【xì】胞均视为有潜在的生物危害性，必【bì】须在【zài】二级生【shēng】物安全台内操作，并请【qǐng】注意防护，所有废液及接触过此细胞【bāo】的器【qì】皿【mǐn】需【xū】要【yào】灭菌后方能丢弃。