人视网膜色素上皮细胞 （D407）

人视网膜色素上皮细胞 (D407)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】 DMEM 培养基(DMEM:GIBCO,添加【jiā】 NaHC031.5g八)，90%;胎牛血清，10%。
2.培【péi】养条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度【dù】：37摄【shè】氏【shì】度，培养箱湿【shī】度为70%-80%。
3. 冻【dòng】存液【yè】：90%*培养基，10%DMSO,现用现配。液【yè】氮【dàn】储存。
 
2)细胞处理：
复【fù】苏【sū】细胞：将含有lmL细胞悬【xuán】液的冻存管在37°C水浴【yù】中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均【jun1】匀。在1000RPM条件下离【lí】心4分钟【zhōng】，弃去上清液，补加l-2mL培养基后【hòu】吹【chuī】匀。然后将所有细胞【bāo】悬液【yè】加入【rù】培养瓶中培【péi】养过【guò】夜（或将细胞悬液【yè】加入l〇cm皿【mǐn】中【zhōng】，加入约8ml培养基，培【péi】养过夜）。第【dì】二【èr】天【tiān】换液并检 查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人视网膜色素上皮细胞 (D407)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离【lí】子的PBS润洗细胞9-21次。力【lì】口2m丨消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养瓶中【zhōng】，置于【yú】37°C培养【yǎng】箱中消化9-21分钟，然【rán】后【hòu】在显微镜下观察细胞消化情【qíng】况，若细胞大【dà】部分变【biàn】圆【yuán】并脱【tuō】落，迅速拿回操作台，轻敲几下【xià】培养瓶后加少量【liàng】培养基终止消化。按6-8ml/瓶补加培养【yǎng】基，轻轻打匀后吸出在【zài】1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃【qì】去上清液，补加l-2mL培养液后吹匀。将细胞【bāo】悬液按1: 2到1: 5的【de】比【bǐ】例分到【dào】新【xīn】的含8ml培养基的【de】新【xīn】皿【mǐn】中或者瓶中。
 
3)细【xì】胞冻存：待细胞生【shēng】长状【zhuàng】态良好时，可进行细胞冻存。贴【tiē】壁细胞冻【dòng】存时，弃去培养【yǎng】基后【hòu】加入【rù】少量胰酶，细胞变圆脱落【luò】后，加入约lml含血清的【de】培【péi】养基后加入【rù】冻存管中，再添【tiān】加1〇%DMSO后进行冻存。
 
注意事项：
收到细胞【bāo】后【hòu】，若发【fā】现干冰【bīng】己挥【huī】发干净【jìng】、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污【wū】染，请立即与我们电联。
所有动物细胞均视为有潜在【zài】的【de】生物危害性，必【bì】须【xū】在二【èr】级生物安全台内【nèi】操作【zuò】，并请注意防【fáng】护，所有废液及接触过此细【xì】胞的器皿【mǐn】需要灭【miè】菌后方能丢弃。
 
人视网膜色素上皮细胞 (D407)细胞特性：
1)来源：视网膜
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
运【yùn】输和【hé】保存：使用【yòng】含有胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到【dào】细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离【lí】心5min后，于洁【jié】净操作台【tái】弃去【qù】上清，加【jiā】入推【tuī】荐【jiàn】使用的培养基后转移至l〇cm培养皿【mǐn】或者T25培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良【liáng】好时，再进行冻【dòng】存【cún】。具体操作见细胞培【péi】养步骤。
细胞用途：仅供使用。