仓鼠卵巢细胞（Led）

仓鼠卵巢细胞(Led)
细胞介绍
Lecl (原先叫做【zuò】Pro-5wgaRl 3C,ATCC)是从【cóng】脯氨酸【suān】缺陷型【xíng】的CHO克隆Pro-5中挑选出来的【de】能抗麦芽凝集素的突变株【zhū】。Lecl缺乏称作GIcNAc-Tl的糖【táng】基转【zhuǎn】移酶，从而N-连【lián】接碳水【shuǐ】化合物被阻断在【zài】Man5GlcNAc2Asn中间【jiān】体【tǐ】。对于研【yán】究N-连接糖基化改变对内源糖蛋白或病【bìng】毒感【gǎn】染、以克隆DNA转染【rǎn】产生的【de】糖蛋白的功能和区隔化的影响，这些细胞十分有【yǒu】用。
 
细胞特性
1)来源：仓鼠卵巢
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保存：使【shǐ】用含有【yǒu】胎牛【niú】血清的2ml冻【dòng】存管发送存活细胞。收到【dào】细胞后，可【kě】在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入【rù】推荐使用【yòng】的【de】培养基【jī】后转移至l〇cm培养皿或者T25培【péi】养【yǎng】瓶中培养，传代达【dá】到细胞【bāo】生长状态良【liáng】好时，再进行冻【dòng】存。具体操【cāo】作见细【xì】胞【bāo】培养步骤。
 
仓鼠卵巢细胞(Led)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备ct-MEM 培养基(ct-MEM，GIBCO，添加 NaHC031.5g八，肌醇43.2mg八，叶酸8.82mg八,0-疏基【jī】乙醇【chún】7.8mg八)，90%;胎牛【niú】血清，10%。
2.培养条件【jiàn】：气相：空气，95%;二氧【yǎng】化碳，5%。温度【dù】：37摄氏度，培养箱湿度为【wéi】70%-80%。
3. 冻存【cún】液【yè】：90%*培养基，10%DMSO,现用现配【pèi】。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液【yè】的冻存管【guǎn】在37°C水浴【yù】中迅【xùn】速【sù】摇晃解冻，加入4mL培【péi】养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分【fèn】钟，弃【qì】去上【shàng】清【qīng】液，补加l-2mL培养基后吹匀。然后【hòu】将所有细胞【bāo】悬液加【jiā】入【rù】培养瓶中培养过夜（或将【jiāng】细胞悬液加【jiā】入l〇cm皿中【zhōng】，加入约【yuē】8ml培养【yǎng】基【jī】，培养过夜）。第二天【tiān】换液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离【lí】子的PBS润【rùn】洗细胞9-21次【cì】。力口 2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中【zhōng】，置于37°C培【péi】养箱中消化9-21分钟，然后【hòu】在显微镜下【xià】观察【chá】细胞消化情况，若细【xì】胞大部分【fèn】变圆并【bìng】脱【tuō】落，迅速拿操作台，轻敲几下培【péi】养瓶后加少量培养基终止消化。按6-8ml/瓶【píng】补加培养基，轻轻打【dǎ】匀后吸出，在【zài】1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟，弃去【qù】上清【qīng】液，补【bǔ】加l-2mL培养【yǎng】液后吹匀【yún】。将细胞悬液【yè】按1: 2到1: 5的比例分到新的含【hán】8ml培【péi】养基的新【xīn】中或【huò】者瓶中。
细胞冻存：待细【xì】胞【bāo】生长状【zhuàng】态良好时，可进行【háng】细胞【bāo】冻存。贴壁细胞【bāo】冻存时，弃去培养基【jī】后加入少量胰【yí】酶，细【xì】胞变圆【yuán】脱【tuō】落后，加入约lml含血清的培养基后加入冻存管【guǎn】中【zhōng】，再添加1〇%DMSO后进【jìn】行冻存【cún】。
 
仓鼠卵巢细胞(Led)注意事项：
收到细胞后【hòu】，若发现干冰己挥发干净、冻存【cún】管瓶盖脱落、破【pò】损【sǔn】及细胞有【yǒu】污【wū】染，请立即【jí】与我【wǒ】们电联。
所有动物细胞均视为【wéi】有潜【qián】在的生物危【wēi】害性，必须【xū】在二级生物【wù】安【ān】全台内操作，并请注意防【fáng】护，所有废液【yè】及接触过【guò】此细胞的器皿需【xū】要【yào】灭菌后方能丢弃。