人食管癌细胞（EC-9706）

人食管癌细胞(EC-9706)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基(RPIVM-1640:GIBCO,添加 NaHC031.5g八【bā】, D-葡萄糖【táng】2.5g八，丙酮酸钠O.llg八)，90%;胎牛血清，10%。
2. 培养【yǎng】条【tiáo】件：气相：空气，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温【wēn】度：37摄氏【shì】度，培养箱【xiāng】湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存液【yè】：90%*培养基，10%DMSO,现用现配【pèi】。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将【jiāng】含【hán】有lmL细【xì】胞【bāo】悬液【yè】的冻【dòng】存管在37°C水浴中迅速【sù】摇晃解【jiě】冻，加入4mL培【péi】养基混合均匀。在【zài】1000RPM条件下离心4分钟，弃【qì】去上清液【yè】，补加【jiā】l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细【xì】胞【bāo】悬液加【jiā】入培养瓶【píng】中培养过夜【yè】（或将【jiāng】 细胞【bāo】悬【xuán】液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过【guò】夜【yè】）。第二天换液并检 查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人食管癌细胞(EC-9706)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不【bú】含钙、镁【měi】离子的PBS润洗细胞9-21次。力口【kǒu】2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-21分钟，然后【hòu】在显微【wēi】镜下观【guān】察细胞消化情况，若细【xì】胞【bāo】大部 分【fèn】变圆并脱落，迅速拿回【huí】操作台，轻【qīng】敲【qiāo】几下【xià】培养【yǎng】瓶后加少量培养【yǎng】基【jī】终止 消化。按【àn】6-8ml/瓶补加【jiā】培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃去上清液【yè】，补加【jiā】l-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按【àn】1: 2到1: 5的比例【lì】分到新的含8ml培【péi】养基的新皿中或者瓶中。
 
3)细胞冻存：待细胞【bāo】生长状态良好时，可【kě】进行细胞冻存。贴壁细胞冻存【cún】时【shí】，弃去培【péi】养基后加入少量胰酶【méi】，细胞变圆脱落后，加【jiā】入约lml含血清的培【péi】养基后
加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
注意事项：
收【shōu】到细【xì】胞后，若发现干冰己挥发干【gàn】净、冻存管瓶盖脱落、破【pò】损及细胞【bāo】有污染，请立即与我【wǒ】们电联。
所有动物细胞【bāo】均视【shì】为有潜【qián】在的【de】生【shēng】物危害性，必须在二级生物安【ān】全【quán】台内【nèi】操作，并请注意防【fáng】护，所有废液及接触【chù】过此细胞的器皿需要灭【miè】菌后方能【néng】丢弃。
 
人食管癌细胞(EC-9706)细胞特性：
1)来源：食管癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
运输和保存：使用含有胎牛血清【qīng】的2ml冻存管发送存活细胞。收【shōu】到【dào】细【xì】胞后， 可【kě】在1000RPM，常温条件下，离【lí】心5min后，于洁【jié】净操作台弃去上清，加入推荐【jiàn】使用【yòng】的【de】培【péi】养基后【hòu】转【zhuǎn】移至【zhì】l〇cm培养皿或者T25培养瓶中培养【yǎng】，传代达到细胞【bāo】生长状态良好时，再进【jìn】行【háng】冻存。具体操作见细胞培养【yǎng】步骤。
细胞用途：仅供使用。