人非小细胞肺癌细胞（HCC827）

人非小细胞肺癌细胞(HCC827)
细胞介绍
这株细【xì】胞建于 1994 年【nián】三月。这株肺腺癌在 EGFR 酪氨酸激【jī】酶区域【yù】有一个获得性突【tū】变(E746-A750 缺失)。患者在 25 岁到 26 岁时每个月抽【chōu】 1 包烟【yān】。在诊断前 12 年不再抽烟【yān】。
 
细胞特性
1.  来源：肺腺癌
2.  形态 ：上皮细胞样
3.  含量：>1x10 6 个/mL
4.  污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5.  规格：T25 瓶或者 1mL 冻存管包装
 
运【yùn】输【shū】和【hé】保存【cún】：使用含【hán】有胎牛血清的 2ml 冻存管发送存活细胞。收【shōu】到【dào】细胞后【hòu】，可在 1000RPM，常温条【tiáo】件下，离心 5min 后，于洁净操【cāo】作台弃去上清，加入推荐使用【yòng】的培养基后转移10cm 培养皿或者 T25 培养瓶【píng】中培【péi】养，传【chuán】代达到【dào】细胞生【shēng】长状态良好时【shí】，再进行冻【dòng】存。具【jù】体操作见细【xì】胞培养步骤。
 
人非小细胞肺癌细胞(HCC827)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
一． 培养基 及 培养 冻存 条件准备：
1）准备RPMI-1640培【péi】养基(RPMI-1640:GIBCO,添加NaHCO 3 1.5g/L,D-葡【pú】萄糖 2.5g/L, 丙酮【tóng】酸钠 0.11g/L)，90%；胎牛血清，10%。
2）培养【yǎng】条件： 气相：空【kōng】气【qì】，95%；二氧化碳，5%。 温度：37 摄【shè】氏【shì】度，培养箱湿度为 70%-80%。
3）冻存液【yè】：90%*培养基，10%DMSO，现【xiàn】用现配。液氮储【chǔ】存。
 
二． 细胞 处理 ：
1） 复【fù】苏细胞【bāo】：将【jiāng】含有【yǒu】 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速【sù】摇晃解冻，加【jiā】入【rù】 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件【jiàn】下离心 4 分钟【zhōng】，弃去上清【qīng】液【yè】，补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后【hòu】将所有细【xì】胞【bāo】悬液加【jiā】入培养瓶【píng】中【zhōng】培夜（或将细【xì】胞悬液加入【rù】 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养【yǎng】过夜）。第二天换液并检查细胞密度【dù】。
2） 细胞【bāo】传代【dài】：如果【guǒ】细胞【bāo】密度达 80%-90%，即可进行传代培养。对于贴壁细胞【bāo】，传代可参【cān】考以下方法【fǎ】：
1. 弃去【qù】培养【yǎng】上清，用【yòng】不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 9-21 次。
2. 加 2ml 消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于【yú】培【péi】养【yǎng】瓶中，置于 37℃培养箱中消化 9-21 分钟【zhōng】，然后在显微【wēi】镜下【xià】观察细胞消化情况，若细【xì】胞【bāo】大部分变圆【yuán】并脱落，迅【xùn】速拿回【huí】操作台，轻敲几下培养瓶后加少量【liàng】培养【yǎng】基终止消化。
3. 按【àn】 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸【xī】出【chū】，在 1000RPM 条【tiáo】件下离心 4 分钟，弃去【qù】上【shàng】清液，补加 1-2mL 培养【yǎng】液后吹匀。
4. 将细【xì】胞悬液【yè】按【àn】 1：2 到 1：5 的比例分到新【xīn】的含 8ml 培养基的新皿中【zhōng】或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进【jìn】行【háng】细【xì】胞冻【dòng】存【cún】。贴壁【bì】细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变【biàn】圆脱落后【hòu】，加【jiā】入约 1ml 含血【xuè】清【qīng】的培养基后加入冻存【cún】管中，再添加 10%DMSO 后进行冻【dòng】存【cún】。
 
人非小细胞肺癌细胞(HCC827)注意事项：
1. 收【shōu】到细胞后，若发现干【gàn】冰【bīng】已挥发干净【jìng】、冻存管【guǎn】瓶【píng】盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们电联。
2. 所有动物细胞均视【shì】为有潜在的生物危害性，必须在【zài】二级生物【wù】安全台内操作，并请注意【yì】防【fáng】护，所有废液及接触过【guò】此细胞【bāo】的器皿需要灭菌后【hòu】方能丢弃。