人食管癌细胞（Eca-109）

人食管癌细胞(Eca-109)
细胞介绍：
1973年建系，来自人食管【guǎn】中段鳞【lín】癌【ái】组织，小块【kuài】法原代培养建【jiàn】系。BALB/c裸鼠移植【zhí】成瘤。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPMI-1640 培养【yǎng】基(RPMI-1640:GIBCO,90%;胎牛【niú】血【xuè】清，10%。
2.培养条件【jiàn】：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱 湿【shī】度为70%-80%。
3.冻【dòng】存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬【xuán】液的冻存【cún】管在37°C水浴中迅速摇晃解冻，加【jiā】入【rù】4mL培养基混合均匀。在【zài】1000RPM条件下离心4分钟，弃去【qù】上清【qīng】液，补加l-2mL培养基后吹【chuī】匀。然后【hòu】将【jiāng】所有细胞悬【xuán】液加【jiā】入培【péi】养【yǎng】瓶中培【péi】养过夜（或将【jiāng】细胞悬液【yè】加入【rù】l〇cm皿中，加入【rù】约8ml培养基，培【péi】养过夜）。第二天换液并【bìng】检查细胞密【mì】度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人食管癌细胞(Eca-109)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上清，用不含【hán】钙【gài】、镁离子的【de】PBS润【rùn】洗细胞9-21次。力口2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中【zhōng】，置于37°C培【péi】养【yǎng】箱中【zhōng】消【xiāo】化9-21分钟，然【rán】后在显微镜下观察细胞【bāo】消化情况，若细胞【bāo】大部【bù】 分变圆并脱落，迅速拿回操【cāo】作台，轻敲几下培养瓶后【hòu】加少量培养基终【zhōng】止消【xiāo】化。按6-8ml/瓶补加培【péi】养基，轻轻打【dǎ】匀后吸出，在1000RPM条件下离心【xīn】4分【fèn】钟，弃去上清【qīng】液，补加l-2mL培养液后【hòu】吹【chuī】匀【yún】。将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例【lì】分到新的含8ml培养基的新皿【mǐn】中。
细胞【bāo】冻存：待细【xì】胞生长状态良好时，可进行细【xì】胞【bāo】冻存。贴壁细胞冻存时，弃【qì】去【qù】培养基后加入少量胰酶【méi】，细胞【bāo】变圆【yuán】脱【tuō】落后，加入约lml含【hán】血清的培养基后 加入冻存管【guǎn】中，再添【tiān】加【jiā】1〇%DMSO后进【jìn】行冻存。
 
注意事项：
收到细【xì】胞【bāo】后【hòu】，若发现干冰己【jǐ】挥发【fā】干净、冻存管【guǎn】瓶【píng】盖脱【tuō】落、破损及细胞有污染，请立即与我们电联。
所有动物细胞【bāo】均视为有潜在的生物危【wēi】害【hài】性，必须在二级生物安全台【tái】内操作，并请注意防护，所有废液【yè】及接触过【guò】此【cǐ】细【xì】胞的【de】器皿【mǐn】需要灭菌后方【fāng】能丢弃瓶中。
 
人食管癌细胞(Eca-109)细胞特性：
1)来源：食管癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
运输和保存：使用【yòng】含有胎牛血清的2ml冻存管【guǎn】发送存活细胞。收到细胞后【hòu】， 可【kě】在1000RPM，常温【wēn】条件下【xià】，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐 使用的培养基【jī】后转移至【zhì】l〇cm培养【yǎng】皿或【huò】者T25培养【yǎng】瓶中【zhōng】培养，传代【dài】达到细胞生长状态良好时【shí】，再进【jìn】行冻存。具体【tǐ】操作见细胞【bāo】培养步骤。
细胞用途：仅供使用。