人膀胱癌细胞 （EJ）

人膀胱癌细胞 (EJ)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备RPMI-1640培养基，90%;胎牛血清，10%。
2. 培养【yǎng】条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度【dù】，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培【péi】养基，10%DMSO,现用【yòng】现配。液【yè】氮【dàn】储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞【bāo】：将含有lmL细胞【bāo】悬液的冻存管在【zài】37°C水浴【yù】中迅速摇晃【huǎng】解冻，加【jiā】 入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条【tiáo】件下【xià】离心4分【fèn】钟，弃去上清液，补加【jiā】l-2mL培养基【jī】后吹匀。然后【hòu】将所【suǒ】有细胞悬液加入【rù】培养瓶中培养过夜【yè】（或将 细胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第【dì】二天【tiān】换液并【bìng】检查细【xì】胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人膀胱癌细胞 (EJ)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培【péi】养上【shàng】清，用不【bú】含钙、镁离子的PBS润【rùn】洗细胞9-21次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培【péi】养箱中消化9-21分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分【fèn】变圆并脱落，迅速拿【ná】回【huí】操【cāo】作台，轻【qīng】敲几【jǐ】下培养瓶后加少【shǎo】量【liàng】培养基终止消化。按6-8ml/瓶补【bǔ】加培养基【jī】，轻轻打匀后吸出【chū】，在1000RPM条件下离【lí】心4分【fèn】钟，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培养液后吹匀。将细胞悬【xuán】液按1: 2到1: 5的比例分到新的【de】含8ml培养基的新【xīn】皿【mǐn】中【zhōng】或者瓶【píng】中【zhōng】。
 
3)细胞冻存：待细胞【bāo】生长状态良好时，可进行【háng】细胞【bāo】冻存。贴壁细胞冻存时，弃【qì】去培【péi】养【yǎng】基后加入少量【liàng】胰【yí】酶，细胞【bāo】变圆脱落后，加入约lml含血清的【de】培养【yǎng】基【jī】后加入冻【dòng】存管中，再【zài】添加1〇%DMSO后进行冻存。

注意事项：
收到细【xì】胞后，若发现【xiàn】干冰己挥发干【gàn】净、冻【dòng】存管瓶盖脱落、破损及细胞【bāo】有污染，请【qǐng】立即与【yǔ】我们电【diàn】联。
所有【yǒu】动物细胞均视【shì】为有潜在的生物危害【hài】性，必须在【zài】二级生【shēng】物安全台内【nèi】操【cāo】作，并请【qǐng】注意防【fáng】护，所有【yǒu】废液及接触过此细胞【bāo】的器皿需要灭菌后【hòu】方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：膀胱癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人膀胱癌细胞 (EJ)运输和【hé】保存：使【shǐ】用含有胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条【tiáo】件下，离心5min后，于洁净操作【zuò】台弃【qì】去上清，加【jiā】入推荐【jiàn】使用的培养基【jī】后转移至l〇cm培【péi】养【yǎng】皿【mǐn】或者【zhě】T25培养瓶中培养【yǎng】，传【chuán】代达【dá】到细胞生长【zhǎng】状态良好时，再进行冻存。具体操作【zuò】见【jiàn】细胞培养【yǎng】步骤。
细胞用途：仅供使用。