人永生化表皮细胞（HaCat）

人永生化表皮细胞(HaCat)
细胞介绍
该细胞源自一【yī】位【wèi】 62 岁【suì】患有黑色【sè】素瘤男性的病灶外围正常皮肤，角蛋【dàn】白、角【jiǎo】化细胞交联外膜蛋白【bái】、中【zhōng】间丝【sī】相关蛋白阳性。
 
细胞特性
1.  来源：正常表皮细胞
2.  形态 ：上皮细胞样，贴壁生长
3.  含量：>1x10 6 个/mL
4.  污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5.  规格：T25 瓶或者 1mL 冻存管包装
 
运输和保存：使用含有【yǒu】胎牛血清的 2ml 冻【dòng】存管发【fā】送存【cún】活【huó】细胞。收【shōu】到细胞后，可在 1000RPM，常温条件【jiàn】下【xià】，离心 5min 后，于洁净操作台弃【qì】去【qù】上清，加入推荐使【shǐ】用【yòng】的培【péi】养基后转移至10cm 培养皿或【huò】者【zhě】 T25 培养瓶中培【péi】养，传代达到细胞生长状态良好时【shí】，再进行【háng】冻存。具体操作见细【xì】胞培养步骤【zhòu】。
 
人永生化表皮细胞(HaCat)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
一． 培养基 及 培养 冻存 条件准备：
1）准备 DMEM 培养【yǎng】基(DMEM，GIBCO)，85%；北【běi】美胎牛【niú】血清【qīng】(United States，GIBCO)，15%。

2）培养条件： 气【qì】相：空气，95%；二氧【yǎng】化碳，5%。 温度：37 摄氏度，培养【yǎng】箱湿【shī】度为 70%-80%。
3）冻存液：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO，现用现配。液【yè】氮储【chǔ】存。
 
二． 细胞 处理 ：
1） 复苏【sū】细胞【bāo】：将含有 1mL 细胞悬液【yè】的冻存管【guǎn】在 37℃水浴中【zhōng】迅【xùn】速摇【yáo】晃解冻，加入 4mL 培养基混合均【jun1】匀。在 1000RPM 条件【jiàn】下离【lí】心 4 分【fèn】钟，弃去上清液【yè】，补加 1-2mL 培【péi】养基后吹匀【yún】。然后将所有细【xì】胞悬液加【jiā】入培养瓶中培养过夜（或将细胞【bāo】悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养【yǎng】过夜）。第二天换液并【bìng】检查细【xì】胞密【mì】度。
2） 细胞传代：如【rú】果细胞密度达 80%-90%，即可进【jìn】行传代【dài】培养。对于贴壁细【xì】胞，传代可参考【kǎo】以下方【fāng】法：
1. 弃去培养【yǎng】上清，用不含钙【gài】、镁【měi】离子的 PBS 润洗细胞【bāo】 9-21 次。
2. 加 2ml 消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于【yú】 37℃培养箱【xiāng】中消化 9-21 分钟，然后在显微镜下观察【chá】细胞消化【huà】情况，若细胞大部分变圆并脱落【luò】，迅速拿回操【cāo】作台，轻【qīng】敲几下培【péi】养【yǎng】瓶【píng】后加少【shǎo】量培养基【jī】终止消化。
3. 按【àn】 6-8ml/瓶补【bǔ】加培养基，轻轻打匀后【hòu】吸出，在 1000RPM 条件下离心【xīn】 4 分钟【zhōng】，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹【chuī】匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 到【dào】 1：5 的比【bǐ】例分到新的含 8ml 培养基【jī】的新皿中或【huò】者【zhě】瓶中。
3）细【xì】胞【bāo】冻存：待细胞生长【zhǎng】状态【tài】良好时，可进行细胞冻存。贴【tiē】壁细胞冻存时【shí】，弃去培【péi】养基后加入少量胰酶，细胞变圆【yuán】脱落后，加入约【yuē】 1ml 含血清的培养基【jī】后加入冻【dòng】存管中，再【zài】添加【jiā】 10%DMSO 后【hòu】进行【háng】冻存。
 
人永生化表皮细胞(HaCat)注意事项：
1. 收到【dào】细胞后，若发现干冰已【yǐ】挥发干净、冻存管瓶盖脱落【luò】、破【pò】损及细胞有污染，请立即与我【wǒ】们电联【lián】。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的【de】生物危害性，必【bì】须【xū】在二级【jí】生物安【ān】全台内操【cāo】作【zuò】，并请【qǐng】注意防护【hù】，所有废液及接触过此【cǐ】细胞的器皿【mǐn】需要灭菌后方能丢【diū】弃。