鸡淋巴瘤细胞（DT40）

鸡淋巴瘤细胞(DT40)
细胞介绍
DT40是来自HylineSC鸡法氏囊淋巴【bā】细胞【bāo】株经鸟类【lèi】白血病病【bìng】毒诱导建株的【de】。原始【shǐ】淋巴瘤用罗氏相关病【bìng】毒【dú】l(RAV-l)感【gǎn】染出生1天的小鸡【jī】得到。法【fǎ】氏囊中的肿【zhǒng】瘤制成细【xì】胞悬液后通过静脉注射输【shū】入【rù】同基因型的受体小鸡。经【jīng】过【guò】一【yī】次体【tǐ】内【nèi】移植后，建立了【le】 DT40细胞株。这株细【xì】胞包含的前【qián】病毒基因整合在c-myc原癌基因的上游，表达的c-myc RNA水平较高。它【tā】缺少一个正常【cháng】c-myc基【jī】因，但含【hán】有两个拷【kǎo】贝ALV去调控的myc基因【yīn】。这株细胞保留了重排免疫球蛋白轻【qīng】链基因(IgL)的能力。在IgL位点，DT40包【bāo】含一个重【chóng】排和【hé】一【yī】个【gè】胚系同【tóng】源【yuán】基因。c-rel基因和v-rel癌基因在DT40细胞株中都能【néng】诱导组【zǔ】织【zhī】相容性(MHC)II类抗原【yuán】表达。v-rel诱导的【de】MHCII表达比c-rel诱导快，且其有【yǒu】效性在数周后达【dá】到【dào】crel的50倍。这株【zhū】细【xì】胞呈淋巴母细胞【bāo】表型。传染性检测表明DT40释放【fàng】低【dī】水平的传染性RAV-1。这株【zhū】细【xì】胞可以用【yòng】于稳转研究。
 
细胞特性
1)来源：鸡淋巴瘤
2)形态：淋巴母细胞
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规【guī】格：T25瓶或者lmL冻【dòng】存管包装运输和保存：使用含有胎牛血清的【de】2ml冻存管发【fā】送存活细【xì】胞。收【shōu】到细胞后，可【kě】在1000RPM，常温【wēn】条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上【shàng】清，加入推【tuī】荐使用的培养【yǎng】基后转移至l〇cm培养或者T25培养瓶中培养，传代达到细胞生长状【zhuàng】态良好时，再【zài】进行冻【dòng】存【cún】。具体操作【zuò】见细胞【bāo】培【péi】养步骤【zhòu】。
 
鸡淋巴瘤细胞(DT40)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1. 准备 DMEM 培【péi】养基(DMEM，GIBCO)，85%;胎牛血【xuè】清，10%，鸡【jī】血清，5%。
2. 培养条【tiáo】件：气相：空气，95%;二氧化【huà】碳，5%。温度：37摄【shè】氏度，培养箱湿度【dù】为70%-80%。
3.冻存【cún】液：90%*培养基【jī】，10%DMSO,现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复【fù】苏细【xì】胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速【sù】摇晃解冻，加入4mL培【péi】养基【jī】混合【hé】均匀。在1000RPM条【tiáo】件下【xià】离【lí】心4分【fèn】钟，弃去上【shàng】清液，补加l-2mL培【péi】养基后吹匀。然后将【jiāng】所有细胞悬液加入【rù】培养瓶中培养过【guò】夜（或【huò】将细胞悬液加入l〇cm皿中，加【jiā】入约8ml培养基，培【péi】养过夜）。第二天换液并检【jiǎn】查细【xì】胞密【mì】度。细【xì】胞传代：如果细【xì】胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方【fāng】法【fǎ】一【yī】：收【shōu】集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加【jiā】l-2mL培养液后吹匀【yún】，将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例【lì】分【fèn】到新的含【hán】8ml培养基的新【xīn】皿中或【huò】者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养【yǎng】基后，将剩余细胞悬【xuán】起，将细胞悬【xuán】液按1: 2到1: 3的比例分到新【xīn】的含【hán】8ml培养基的新皿【mǐn】中或者瓶中。细胞【bāo】冻存【cún】：待细胞生长状【zhuàng】态良好时【shí】，可进【jìn】行【háng】细【xì】胞冻【dòng】存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离【lí】心【xīn】4分钟【zhōng】，少量保【bǎo】存上清液（防【fáng】止细【xì】胞吸走)，入【rù】部分【fèn】新鲜【xiān】培养基，加入【rù】到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
 
鸡淋巴瘤细胞(DT40)注意事项：
收到【dào】细胞后，若【ruò】发现【xiàn】干冰己挥【huī】发干净、冻存管瓶盖【gài】脱落、破损及细胞有污【wū】染，请立即与我们【men】电【diàn】联。
所有动物细【xì】胞均视【shì】为有潜在的【de】生物【wù】危害性，必须在二级【jí】生物安全台内操【cāo】作，并【bìng】请注意防护，所有废液及接触【chù】过此【cǐ】细胞的器皿【mǐn】需要【yào】灭菌后【hòu】方能丢弃。