中国仓鼠卵巢细胞（CHO/DHFR）

中国仓鼠卵巢细胞(CHO/DHFR)
细胞介绍
该细胞为【wéi】二氢【qīng】叶【yè】酸还原酶缺陷细胞【bāo】。在没有HT (胸【xiōng】腺嘧啶）时细【xì】胞会死【sǐ】亡【wáng】。细胞培液中加氨甲喋呤可以防止对药【yào】物低抗性的回变细胞的【de】生长。
 
细胞特性
1)来源：中国仓鼠
2)形态：贴壁生长时，呈上皮细胞样。
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格【gé】：T25瓶或者lmL冻存管包装运【yùn】输和保存：可【kě】选择干冰运输及发送复【fù】苏存【cún】活细胞方式：（1)干冰运输，收【shōu】到【dào】后立即转【zhuǎn】入液氮【dàn】冻存或直接复苏；（2)存【cún】活细【xì】胞，收【shōu】到后应【yīng】继续【xù】生长，传代达到【dào】细胞生【shēng】长状态良好时，再进行冻存。具【jù】体操作见细胞培【péi】养步骤。
 
中国仓鼠卵巢细胞(CHO/DHFR)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】IMDM培养基【jī】(GIBCO);胎牛血清，15%，双抗【kàng】1%;用【yòng】于表达蛋白时，也可使用悬浮培养基【jī】，使【shǐ】细胞【bāo】悬浮生长。
2. 培养条件：气相【xiàng】：空气【qì】，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温度：37摄氏度，培【péi】养箱湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
1.复苏细胞：将含有lmL细胞【bāo】悬【xuán】液的冻【dòng】存管在37°C水浴中迅速摇晃【huǎng】解冻，加入【rù】4mL培养【yǎng】基混【hún】合均【jun1】匀。在1000RPM条件下离心4分【fèn】钟，弃去上清【qīng】液【yè】，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培【péi】养瓶中培【péi】养过夜（或将
细【xì】胞悬【xuán】液【yè】加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过【guò】夜）。第二天换液【yè】并【bìng】检查细胞密度。
2.细胞传代：如【rú】果【guǒ】细胞密度达80%-90%，即【jí】可进行传代培养【yǎng】。对于【yú】贴【tiē】壁细胞，传代可【kě】参考以【yǐ】下方法：弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗【xǐ】细胞【bāo】9-21次。力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于【yú】37°C培养箱中消化9-21分【fèn】钟，然后【hòu】在显微镜下观察【chá】细胞消化情况，若细胞【bāo】大部分【fèn】变圆【yuán】并脱落，迅速拿回操作【zuò】台【tái】，轻敲几下培养瓶后加少【shǎo】量培养基终止按6-8ml/瓶【píng】补【bǔ】加培养基，轻【qīng】轻打【dǎ】匀【yún】后吸出，在1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃，补【bǔ】加l-2mL培养液后吹匀。将【jiāng】细【xì】胞悬【xuán】液按1: 2到1: 5的比例分到新的【de】含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细胞冻存【cún】时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底9-21次后加入【rù】lml胰【yí】酶，细胞变圆脱落后，加【jiā】入2ml*培养基终【zhōng】止【zhǐ】消化，可使用血球计数板【bǎn】计【jì】数。1000RPM离心5分钟去【qù】掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至终浓度【dù】为【wéi】10%。加入【rù】DMSO后迅速混【hún】匀，按每lml的数【shù】量【liàng】分配到冻存管【guǎn】中，注意冻管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数【shù】目大于1X106个【gè】细胞冻【dòng】存。将冻存【cún】管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至【zhì】少2个小时以后转入【rù】液【yè】氮【dàn】灌储存【cún】。记录【lù】冻【dòng】存管位【wèi】置【zhì】以便下【xià】次拿取【qǔ】。
 
中国仓鼠卵巢细胞(CHO/DHFR)注意事项：
收到细胞后【hòu】，若发现【xiàn】干冰己【jǐ】挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破【pò】损及【jí】细胞有【yǒu】污【wū】染，请立即与我们【men】电联。
所有动物【wù】细胞均【jun1】视为【wéi】有潜在的生物危【wēi】害性，必须在二级生物【wù】安全台【tái】内【nèi】操【cāo】作，并请注意防护，所有废液及接触【chù】过此【cǐ】细胞的器皿需要灭菌后方【fāng】能丢弃。