猪肺泡巨噬细胞（3D4-21）

猪肺泡巨噬细胞(3D4-21)
细胞介绍
母细胞3D4来源于pSV3neo质粒转【zhuǎn】染【rǎn】猪原代【dài】肺泡巨噬细【xì】胞得到的。该克隆【lóng】通过G418筛选得到【dào】。
 
细胞特性
1)来源：猪肺
2)形态：巨噬细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包
 
细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请【qǐng】先在显微镜下确认细胞生长【zhǎng】状态，去掉封口膜并【bìng】将T25瓶置于37°C培【péi】养约2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4. 如果细【xì】胞长满【mǎn】（90%以上）请及时进行细胞传代，传【chuán】代培养用6ml本公司附带的*培【péi】养基。
5.接【jiē】到【dào】细胞次日，请【qǐng】检查细胞【bāo】是否【fǒu】污染，若发现污染或疑似污染，请及时与【yǔ】我们取【qǔ】得电【diàn】联。
 
猪肺泡巨噬细胞(3D4-21)细胞用途：仅供使用。
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备 RPIVM-1640 培养基（RPMI-1640，GIBCO)，90%;添加0_lmM NEAA, ImM丙酮酸钠【nà】；胎牛【niú】血清，10%。
2.培养条件：气相：空气，95%;二【èr】氧化【huà】碳，5%。温【wēn】度：37°C，培养箱湿度为 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细【xì】胞【bāo】：将【jiāng】含有lmL细胞【bāo】悬【xuán】液的冻存【cún】管迅速放入【rù】37°C水浴【yù】中（水面要【yào】低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先【xiān】准备好的含有4mL培养【yǎng】基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分【fèn】钟，弃去【qù】上【shàng】清液，加【jiā】入lmL培养基后吹匀。然后将所【suǒ】有细胞悬液移入含【hán】有5ml培养基的培【péi】养【yǎng】瓶中培【péi】养【yǎng】过夜。第二天换液【yè】并检查细【xì】胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上【shàng】清【qīng】，用不含钙、镁离子的PBS润洗细【xì】胞【bāo】9-21次【cì】。力口 2m丨消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-21分钟，然后在显微镜【jìng】下【xià】观察细胞消化情况，若细胞大部分【fèn】变圆并脱落，迅速【sù】拿操作【zuò】台，轻敲几下培【péi】养瓶后加【jiā】入【rù】3ml此细胞的培养基终止消化。轻轻吹打后吸出，移入【rù】15ml离【lí】心管中【zhōng】，在【zài】1000RPM条【tiáo】件下离【lí】心4分【fèn】钟，弃去【qù】上【shàng】清【qīng】液，加【jiā】入【rù】lmL培养液后吹匀。移入到事【shì】先准【zhǔn】备好的含【hán】有5ml培养基的T-25培【péi】养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可【kě】进行细胞冻存。贴壁【bì】细胞冻存时，先要消化处理【lǐ】并进行细胞计【jì】数【shù】。消化方法【fǎ】按照细【xì】胞传代方法【fǎ】的9-21步骤进行，后的重悬液使用血清。悬浮细【xì】胞【bāo】直接【jiē】计数后离心【xīn】，用血清重【chóng】悬浮【fú】，加DMSO至终浓度为【wéi】10%。加入DMSO后【hòu】迅【xùn】速混【hún】匀，按每【měi】lml的数量分配【pèi】到冻【dòng】存管【guǎn】中。本公司按每个冻【dòng】存管细胞数目大于1X106个细【xì】胞冻存【cún】。
 
猪肺泡巨噬细胞(3D4-21)注意事项：
收到细胞后，若发【fā】现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖【gài】脱【tuō】落、破损及【jí】细胞有污染，请立即与我【wǒ】们电联【lián】。
所有动物细胞均视为【wéi】有潜在【zài】的【de】生物危害【hài】性，必须【xū】在二级生物安全台内操作，并请注意【yì】防护，所有废液及接触过此【cǐ】细胞【bāo】的【de】器皿需要灭【miè】菌后【hòu】方能丢弃【qì】。