中国仓鼠卵巢细胞（CTLA4 Ig-24）

中国仓鼠卵巢细胞(CTLA4 Ig-24)
细胞介绍
CHO 细【xì】胞以【yǐ】人 CTLA-4 基因细胞外结【jié】构【gòu】域【yù】序列【liè】和人 IgCgamma1 的绞【jiǎo】链区，CH2 和CH#区序列的【de】融合结构转染，构【gòu】建了这株细胞。它们表达融合蛋【dàn】白(CTLA4Ig)。
 
细胞特性
1）来源：中国仓鼠卵巢
2）形态 ：可贴壁生长（上皮细胞样），也可悬浮生长（圆球形）
3）含量：>1x10 6 个/mL
4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5）规格：T25 瓶或者 1mL 冻存管包装运输和保存：使用【yòng】含有胎牛血【xuè】清【qīng】的 2ml 冻存管发送【sòng】存【cún】活细胞。收到细胞后【hòu】，可在 1000RPM，常【cháng】温条【tiáo】件【jiàn】下【xià】，离心 5min 后，于洁净操作台弃去上清，加【jiā】入推荐【jiàn】使用的培养基后至10cm 培养【yǎng】皿或者 T25 培养瓶中培养，传【chuán】代达到细胞生长【zhǎng】状态【tài】良好时，再进行冻存【cún】。具【jù】体操作见细胞培【péi】养【yǎng】步【bù】骤。
 
中国仓鼠卵巢细胞(CTLA4 Ig-24)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
一． 培养基 及 培养 冻存 条件准备：
培养条件：贴壁【bì】生长【zhǎng】时，选【xuǎn】择【zé】 DMEM-H 培养基(DMEM-H:GIBCO,添加 NaHCO3 1.5g/L, 添加 0.2 mM 脯氨【ān】酸,0.001 mM 氨甲蝶呤)，90%；胎牛血清，10%。[MTX 是基因 DHFR 产物的抑制物。当培养【yǎng】基中存【cún】MTX 时，MTX 可渗入细胞【bāo】内与 DHFR 蛋白结合，使核苷酸的【de】合成受【shòu】阻【zǔ】。但是 DHFR 基因连同其【qí】附近几【jǐ】千 KB的 DNA 还会扩增【zēng】以满足核苷酸合成的【de】需要。理【lǐ】论【lùn】上 MTX 浓度越【yuè】大，DHFR 基因扩增越【yuè】多，与 DHFR 基因连锁的目的蛋白基因也表达得越【yuè】多【duō】]悬浮培【péi】养时，请【qǐng】使用【yòng】悬浮【fú】生长培养基，培养基为：EX-CELL CD-CHO CHOSerum-free Medium,Chemically Defined(Sigma-Aldrich)添加物：L- 谷氨酰胺（Sigma-Aldrich）Anti-Clumping Agent(Gibco)备注【zhù】 ：CD-CHO CHO Serum-free Medium 请【qǐng】按【àn】照培养基配制说明书配【pèi】制，L-谷氨酰胺【àn】配制浓度为 200mM，工作浓度为 8mM（即稀释 25 倍【bèi】，如 500ml CHOSerumfreeMedium中添加 20ml 200mM L-谷氨【ān】酰胺，抗结团【tuán】剂使用【yòng】为 1%，即 500ml CHOSerum-free Medium 中添加 5ml 抗结团剂）
1）培养【yǎng】条件： 气相【xiàng】：空【kōng】气，95%；二【èr】氧化碳，5%。 温度：37 摄氏度【dù】，培养【yǎng】箱湿度为 70%-80%。
2）冻存液：90%*培养基【jī】（贴壁生长【zhǎng】冻存时【shí】）或 90%悬浮培养基（悬浮生时），10%DMSO，现用现【xiàn】配。液氮储存。
二． 细胞 处理 ：
1） 复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管【guǎn】在 37℃水浴【yù】中迅速【sù】摇晃解冻，加入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件【jiàn】下离心 4 分钟，弃去【qù】上【shàng】清液，补加【jiā】 1-2mL 培养【yǎng】基后吹匀。然后【hòu】将所有【yǒu】细胞悬液加入培【péi】养瓶中【zhōng】培养（或将【jiāng】细胞悬液加入 10cm 皿【mǐn】中，加入约 8ml 培养基，培养过【guò】夜）。第二天换【huàn】液并【bìng】检【jiǎn】查细胞密度【dù】。
2） 细胞传【chuán】代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行【háng】传代【dài】培养。对于贴【tiē】壁细胞，传代可参【cān】考【kǎo】以下【xià】方【fāng】法：
1. 弃去【qù】培养【yǎng】上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞【bāo】 9-21 次。
2. 加 2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培养箱中消【xiāo】化 9-21 分钟【zhōng】，然后在显【xiǎn】微【wēi】镜下观察细【xì】胞消化【huà】情【qíng】况，若细胞大部分【fèn】变【biàn】圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲【qiāo】几【jǐ】下培养【yǎng】瓶后【hòu】加少量培养基【jī】终止【zhǐ】消化。
3. 按【àn】 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻【qīng】打匀后吸【xī】出，在 1000RPM 条件下离【lí】心 4 分【fèn】钟【zhōng】，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后【hòu】吹【chuī】匀。
4. 将细胞悬液按【àn】 1：2 到 1：5 的比例分到【dào】新的【de】含 8ml 培养基的新皿中或者【zhě】瓶【píng】中。对于悬浮细【xì】胞【bāo】，传代可参考以下方【fāng】法：
方【fāng】法一：收集细胞，1000RPM 条件下离心 4 分钟【zhōng】，弃去上清液，补加 1-2mL培养液后吹匀，将【jiāng】细胞悬液【yè】按 1：2 到 1：5 的比例分到【dào】新的含 8ml 培养基的【de】新皿【mǐn】中或者【zhě】瓶中【zhōng】。
方法二：可选【xuǎn】择半数换液方式【shì】，弃去半数【shù】培养基后【hòu】，将剩余细胞悬【xuán】起，将细胞悬液按 1：2 到 1：3 的比【bǐ】例分【fèn】到【dào】新的含 8ml 培养【yǎng】基的【de】新皿中或者瓶中【zhōng】。
3）细胞冻【dòng】存：待细胞生【shēng】长【zhǎng】状态良【liáng】好时，可【kě】进行细胞冻存。贴壁细【xì】胞冻存【cún】时，弃去【qù】培【péi】养基后加入少量胰酶，细【xì】胞变圆【yuán】脱落后，加入约【yuē】 1ml 含血【xuè】清的培养基后加入冻存管【guǎn】中，再添加 10%DMSO 后【hòu】进行冻存。悬【xuán】浮细胞冻存时，应将细胞收集【jí】，1000RPM 条件下离心 4 分钟，少量保存上清液（防止细胞吸【xī】走），加入部分新鲜培养【yǎng】基，加【jiā】入到冻存管中，在【zài】冻存管【guǎn】中加入 10%DMSO 后【hòu】进【jìn】行冻存。
 
中国仓鼠卵巢细胞(CTLA4 Ig-24)注意事项：
1. 收到细【xì】胞后，若发现干冰已挥发干净、冻【dòng】存管瓶盖脱【tuō】落、破损【sǔn】及细胞有污染，请立即【jí】与我【wǒ】们电【diàn】联。
2. 所有动物【wù】细【xì】胞均视【shì】为【wéi】有潜在的生【shēng】物【wù】危害性，必须在二级生物安全台内操作，并【bìng】请注意防护【hù】，所有【yǒu】废液及接触过此细【xì】胞的器皿需要灭菌后方能丢弃【qì】。