中国仓鼠 卵巢细胞（CHO-S）

中国仓鼠 卵巢细胞(CHO-S)
细胞介绍
贴壁生长及悬浮生长均可（用于蛋白表【biǎo】达时，应使用悬浮【fú】生【shēng】长状态，此时细胞【bāo】生【shēng】长状态更好，比表面积【jī】更【gèng】高，生物【wù】反应器中的传质、传【chuán】热效率更【gèng】高，同【tóng】时也可提高【gāo】生物【wù】反应器【qì】空间使用效【xiào】率。工业【yè】上大规模生产单【dān】抗，重组蛋，大部分使用悬浮培养【yǎng】法来生产）
 
细胞特性
1  来源：中国仓鼠
2  形态 ：成纤维细胞样
3  含量：>1x10 6 个/mL
4  污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5  规格：T25 瓶或者 1mL 冻存管包装
 
运输和保存 ：可【kě】选择干冰运输及发【fā】送复苏存活细【xì】胞方【fāng】式【shì】：（1）干冰运输【shū】，收到后立即转入液氮冻【dòng】存或直接复苏；（2）存【cún】活【huó】细胞【bāo】，收到后【hòu】应继续生长【zhǎng】，传【chuán】代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操【cāo】作见细胞培【péi】养步骤。
 
中国仓鼠 卵巢细胞(CHO-S)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
一． 培养基 及 培养 冻存 条件准备：
1）培养基信息【xī】：EX-CELL CD-CHO CHO Serum-free Medium,ChemicallyDefined(Sigma-Aldrich)添加【jiā】物：L- 谷氨酰胺（Sigma-Aldrich）Anti-Clumping Agent(Gibco)备注 ：CD-CHO CHO Serum-free Medium 请按照培养基【jī】配制说明【míng】书配制，L-谷【gǔ】氨酰胺配制浓度为 200mM，工作浓度为 8mM（即稀【xī】释【shì】 25 倍，如 500ml CHO Serum-freMedium 中添【tiān】加 20ml 200mM L-谷氨酰【xiān】胺，抗结团【tuán】剂使用为 1%，即 500ml CHOSerum-free Medium 中添加 5ml 抗【kàng】结团剂【jì】）
2）培养条件： 气【qì】相【xiàng】：空气，95%；二氧化【huà】碳，5%。 温【wēn】度：37 摄氏度，培养箱湿度为 70%-80%。
3）冻【dòng】存液：90%*培养基【jī】，10%DMSO，现用现配【pèi】。液氮储存【cún】。
二． 细胞 处理 ：
传代、转染、建库【kù】及【jí】实验室规模小试方法：赛百慷（上【shàng】海）生物技术股份【fèn】有限【xiàn】公司提供的 CHO-S 细【xì】胞【bāo】为已驯化的细胞，具有良好【hǎo】的【de】适应悬浮生【shēng】长及适应【yīng】无血清培养【yǎng】基生长特性。
传代 方法：
1.10cm 皿中培养：使【shǐ】用【yòng】计数器（计数器【qì】或【huò】者血球计数板计数）计数，接【jiē】种【zhǒng】密度【dù】为 3×10 5 个【gè】细胞/ml 接种于提前 37℃预热的新鲜培【péi】养基中（建议培【péi】养基取 7-8ml，此【cǐ】时细胞生长状态较好），置于摇床【chuáng】上生长，转速为【wéi】 120-130rpm，湿度为 9-21%，5%二氧【yǎng】化碳，温度为 37℃。
2.培养约【yuē】 9-21 天，细胞【bāo】密度达到 1×10 6 个【gè】活细胞/ml 时，应 1000rpm，25℃离心【xīn】5min，离【lí】心后计数（此【cǐ】时应稀释），然后接种密度为【wéi】 3×10 5 个细胞/ml 接【jiē】种于【yú】提【tí】前 37℃预热的【de】新鲜培【péi】养基中【zhōng】。细胞【bāo】数目足够【gòu】时，可冻存。也可选【xuǎn】择 125ml 或者【zhě】 250ml 摇瓶中【zhōng】培养细胞。（注意细胞【bāo】培养【yǎng】液体积一般在总体积的【de】五分之一【yī】，如【rú】在 125ml 摇瓶中【zhōng】加入【rù】 25ml 培养物，应注意【yì】在摇瓶中培养细胞时【shí】应将瓶【píng】盖稍微拧松，以便于气【qì】体交换，同时也不宜【yí】拧得过松，防止细胞污染）
转染 方法：
在连续 5 代细胞密【mì】度未超过 2×10 6 个活细【xì】胞【bāo】/ml 时，可【kě】以使用 FreeStyle Max 转染试剂（Gibco，货号【hào】：16447）在 CD CHO Serum-free Medium 中直接【jiē】转染。（注【zhù】
意：Anti-Clumping Agent 会干扰【rǎo】 FreeStyle Max 转【zhuǎn】染试剂转染【rǎn】效【xiào】率【lǜ】，同【tóng】时【shí】也会干扰其他脂质体型转染试剂的转染效率）
建库方法 ：
若需要建库【kù】，可将【jiāng】细胞接种于 125ml 摇瓶中（接种密度为 3×10 5 个细胞/ml，总【zǒng】体积【jī】为 25ml），此方法【fǎ】同样适用于稳定表达所需要蛋白的细胞株的建库工作【zuò】。建【jiàn】库时，需要【yào】先建【jiàn】初【chū】级库【kù】（master bank）（一【yī】般【bān】为 10 支【zhī】，每支细胞总数不【bú】少于 4.5×10 7 个细胞【bāo】），此【cǐ】步骤结束后，从冻存的初级库中取出一支复苏，按照同样步骤【zhòu】建次级库（working bank）（相同的，一般为 10 支，每支细【xì】胞总数不【bú】少于 4.5×10 7个细胞）。实验室 规模小【xiǎo】试【shì】方法：将挑选出的稳定细【xì】胞【bāo】株【zhū】从【cóng】 96 孔板【bǎn】到 24 孔板到 6 孔板到 10cm 皿【mǐn】中逐级扩大培养后（此时需要注【zhù】意在培养【yǎng】过程中应及【jí】时保种，以防止【zhǐ】后【hòu】续【xù】步【bù】骤出现污染，及应【yīng】对可能【néng】的表达量衰【shuāi】退现象）以 3×10 5 个细【xì】胞/ml 接种【zhǒng】于 125ml 摇瓶中，转速【sù】为120-130rpm，温度为 37℃，湿【shī】度为 9-21%，连续培【péi】养一【yī】周，每天取样做出相应的细胞生【shēng】长曲线，细【xì】胞活率【lǜ】曲线，蛋白【bái】表【biǎo】达曲线，可根【gēn】据实【shí】际情况，每天取样测【cè】出培养基【jī】中葡萄糖含量，以便决定是否要补加葡【pú】萄【táo】糖，同时【shí】可使用 CHO Feedioreactor Supplement 作为细胞发酵中补【bǔ】料【liào】，同时做出相【xiàng】应的细【xì】胞生长曲线，细胞活率曲【qǔ】线，蛋白表达曲线，为中试放大补料添加做出【chū】合【hé】理数据支持【chí】。
 
中国仓鼠 卵巢细胞(CHO-S)注意事项：
1. 收到细胞后，若发现【xiàn】干冰已挥发【fā】干净、冻存管瓶盖脱落、破【pò】损及细胞【bāo】有污染，请立即与我们【men】电联。
2. 所有动物细【xì】胞均视为有潜在【zài】的生物危害【hài】性，必须在二级【jí】生物安全台内操【cāo】作，并请【qǐng】注【zhù】意防护，所有废液及接触【chù】过此细胞【bāo】的器皿需要灭菌后方【fāng】能丢【diū】弃。