人胃癌前细胞（GES-1）

人胃癌前细胞(GES-1)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 DMEM-H 培【péi】养基(DMEM-H:GIBCO, 添加 NaHC031.5g八【bā】)，90%;胎牛血清，10%。PS:1%。
2.培养条件【jiàn】：气相：空气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度【dù】：37摄【shè】氏度【dù】，培养【yǎng】箱湿度为70%-80%。
3. 冻存液：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO,现【xiàn】用现配。液【yè】氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细【xì】胞：将含有【yǒu】lmL细【xì】胞悬液【yè】的冻【dòng】存管在37°C水【shuǐ】浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀【yún】。在【zài】1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后吹【chuī】匀。然后将所【suǒ】有【yǒu】细【xì】胞悬【xuán】液加入【rù】培养【yǎng】瓶中培养过【guò】夜（或将细【xì】胞悬液加入l〇cm皿【mǐn】中，加入约8ml培【péi】养基，培【péi】养过夜）。第二天【tiān】换液并检【jiǎn】查细【xì】胞密度【dù】。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人胃癌前细胞(GES-1)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离【lí】子的【de】PBS润洗细胞9-21次。力口2m丨消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于37°C培养箱中【zhōng】消化9-21分钟，然后在显微镜【jìng】下观察细胞消化情况，若细胞【bāo】大部【bù】分变圆【yuán】并【bìng】脱【tuō】落，迅速拿【ná】回【huí】操【cāo】作【zuò】台，轻【qīng】敲几下培【péi】养瓶后加【jiā】少量培养基终止消化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸【xī】出【chū】，在1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟【zhōng】，弃【qì】去上清液【yè】，补加l-2mL培养液【yè】后吹匀。将细胞悬液按【àn】1: 2到1: 5的比【bǐ】例分到新的含8ml培养基的新【xīn】皿中【zhōng】或者瓶中。
 
3)细胞【bāo】冻存：待细胞生【shēng】长状态良好时，可进行细胞冻【dòng】存。贴【tiē】壁【bì】细胞冻存时，弃去培养【yǎng】基后【hòu】加入少量【liàng】胰酶【méi】，细胞变圆脱落后，加入约lml含血清【qīng】的培【péi】养基后加入冻存管【guǎn】中【zhōng】，再添加【jiā】1〇%DMSO后进【jìn】行冻存。
 
注意事项：
收到细胞后，若发现干冰【bīng】己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损【sǔn】及细胞有【yǒu】污染，请立即与我【wǒ】们【men】电【diàn】联【lián】。
所有【yǒu】动物【wù】细胞均视为有潜在的生【shēng】物危害性，必须在二级生物安全【quán】台内操作，并请【qǐng】注意防护，所【suǒ】有废液及接触过此细胞的器皿需要【yào】灭【miè】菌【jun1】后方【fāng】能丢【diū】弃。
 
细胞特性：
1)来源：胃
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人胃癌前细胞(GES-1)运输和【hé】保存：使用含【hán】有胎牛血【xuè】清的2ml冻存管发送存活细胞【bāo】。收到细胞【bāo】后【hòu】， 可在1000RPM，常温【wēn】条件下，离心5min后，于洁净【jìng】操作台弃去上清，加入推【tuī】荐 使用的培养基后转移至l〇cm培养皿【mǐn】或者T25培养瓶【píng】中【zhōng】培养【yǎng】，传代达到细【xì】胞生长 状【zhuàng】态良好时，再【zài】进【jìn】行冻存【cún】。具【jù】体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。