人高转移肺癌细胞（95-D）

人高转移肺癌细胞（95-D)
细胞介绍
这是一株高转移肺癌细胞。
 
细胞特性
1)来源：肺癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶【píng】或【huò】者lmL冻存管包【bāo】装运输和保存：可选择干冰运输及【jí】发【fā】送复苏【sū】存活细胞方式：（1)干【gàn】冰运【yùn】输，收到后立即转入【rù】液氮冻存【cún】或直接复【fù】苏；（2)存活细胞，收到后应继续生长，传代【dài】达到细胞生长状【zhuàng】态良好时，再进。具体操作见【jiàn】细胞培养步骤。
 
人高转移肺癌细胞（95-D)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基(RPIVM-1640:GIBCO,添加 NaHC03 1.5g/L,D-葡【pú】萄糖【táng】2.5g八，丙酮酸【suān】钠【nà】O.llg八)，90%;胎牛血【xuè】清，10%。
2. 培养条件：气【qì】相：空【kōng】气【qì】，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏【shì】度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用现配【pèi】。液【yè】氮储存。
 
2)细胞处理：
复【fù】苏细胞：将【jiāng】含有lmL细胞悬【xuán】液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培【péi】养【yǎng】基混【hún】合均匀。在1000RPM条件下【xià】离心4分【fèn】钟，弃去【qù】上清液，补【bǔ】加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液【yè】加【jiā】入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液【yè】加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养【yǎng】过【guò】夜）。第二天换【huàn】液【yè】并检【jiǎn】查细【xì】胞密【mì】度。细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即【jí】可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁【měi】离【lí】子的PBS润洗细胞9-21次。力口【kǒu】 2m丨消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养瓶【píng】中【zhōng】，置于【yú】37°C培养【yǎng】箱中消化9-21分钟，然后在显微镜下观察【chá】细胞消化情【qíng】况，若细胞大部分变圆【yuán】并脱落，迅【xùn】速【sù】拿作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。按6-8ml/瓶补加培【péi】养基【jī】，轻轻打匀后【hòu】吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培养液后吹匀【yún】。将【jiāng】细胞悬【xuán】液按1: 2到1: 5的比例分到【dào】新的【de】含8ml培养【yǎng】基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集【jí】细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上【shàng】清液【yè】，补加l-2mL培养液后吹匀【yún】，将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例【lì】分到新的含8ml培养基【jī】的新皿中或者【zhě】瓶【píng】中。
方法二【èr】：可选择【zé】半数【shù】换【huàn】液方式，弃【qì】去半【bàn】数【shù】培养基后，将【jiāng】剩余【yú】细【xì】胞悬起，将【jiāng】细【xì】胞悬液按1: 2到1: 3的比例分【fèn】到【dào】新的含【hán】8ml培养基的新皿中或者瓶【píng】中【zhōng】。细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进【jìn】行细胞冻存【cún】。贴壁细胞【bāo】冻【dòng】存时，弃去【qù】培养基【jī】后加入【rù】少量【liàng】胰酶，细【xì】胞【bāo】变【biàn】圆脱落后，加入约lml含血【xuè】清的培养基后加入冻存管【guǎn】中，再添加【jiā】1〇%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将【jiāng】细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液【yè】（防止细胞吸走)，加入【rù】部分新鲜培养【yǎng】基，加入到冻存管中，在【zài】冻存管中加入1〇%DMSO后进行冻【dòng】存。
 
人高转移肺癌细胞（95-D)注意事项：
收到细胞后，若【ruò】发现干冰己【jǐ】挥【huī】发干净、冻存管【guǎn】瓶盖脱落、破损【sǔn】及细胞有污染【rǎn】，请立即与【yǔ】我们电【diàn】联。
所有动【dòng】物细胞均视【shì】为有潜在的【de】生物危害性，必须在二【èr】级【jí】生【shēng】物安全台内操作，并【bìng】请【qǐng】注意防护，所有废液及接【jiē】触【chù】过此【cǐ】细胞的【de】器皿需要灭菌后方能丢弃。