人结直肠腺癌细胞（HCT-8）

人结直肠腺癌细胞(HCT-8)
细胞介绍：
HCT-8与HRT-18是【shì】一样【yàng】的【de】。角蛋白免疫过氧化物酶染色【sè】阳性。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基(RPIVM-1640:GIBCO,添【tiān】加【jiā】 NaHC031.5g八, D-葡萄糖2.5g八【bā】，丙酮酸钠O.llg八【bā】)，90%;胎牛血【xuè】清【qīng】，10%。
2. 培养条件：气相：空【kōng】气，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温【wēn】度：37摄【shè】氏度，培养箱湿【shī】度为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细【xì】胞悬液的冻存【cún】管在37°C水浴中迅速【sù】摇晃解冻，加入【rù】4mL培养【yǎng】基混合均匀。在1000RPM条【tiáo】件【jiàn】下【xià】离心4分【fèn】钟，弃去上清【qīng】液，补【bǔ】加l-2mL培养基后吹【chuī】匀。然后【hòu】将所有细胞悬【xuán】液【yè】加入培【péi】养【yǎng】瓶中培养过【guò】夜（或将 细胞悬液加入【rù】l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第【dì】二天换液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人结直肠腺癌细胞(HCT-8)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去培养上清，用不含钙、镁离子的【de】PBS润【rùn】洗细胞9-22次。力口2m丨消【xiāo】化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于37°C培养箱中【zhōng】消化9-22分钟，然后在显微镜下观察细胞【bāo】消化【huà】情【qíng】况【kuàng】，若细胞大部 分变圆并【bìng】脱落，迅速【sù】拿回操作台，轻敲几【jǐ】下培养瓶后加少量培【péi】养基【jī】终止消化。按【àn】6-8ml/瓶【píng】补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液【yè】，补【bǔ】加【jiā】l-2mL培养液后吹【chuī】匀。将细胞悬【xuán】液【yè】按1: 2到1: 5的比例分到新【xīn】的含8ml培养基的新皿中【zhōng】或者瓶【píng】中【zhōng】。
 
3)细胞【bāo】冻存：待细【xì】胞【bāo】生长状【zhuàng】态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞【bāo】冻【dòng】存时，弃【qì】去培【péi】养基后加入【rù】少量胰酶，细胞变圆脱【tuō】落后，加入约lml含血清【qīng】的【de】培养基后加入冻存管中【zhōng】，再添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
注意事项：
收到细胞后，若【ruò】发现干冰己【jǐ】挥发干净、冻【dòng】存管瓶盖【gài】脱落、破损及细胞【bāo】有污染，请立即与我们电联。
所有动物细胞均视【shì】为有【yǒu】潜【qián】在的【de】生物危害性，必【bì】须在二级【jí】生物安全【quán】台内操【cāo】作，并请注意防护，所【suǒ】有【yǒu】废液及接触【chù】过此细【xì】胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：结肠
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人结直肠腺癌细胞(HCT-8)运输【shū】和保【bǎo】存【cún】：可选择【zé】干冰运输及发送复苏存【cún】活细胞方式【shì】：（1)干冰运输，收【shōu】到【dào】后立【lì】即转入【rù】液氮冻存或直接复苏；（2)存【cún】活细胞，收到后应【yīng】继续生长【zhǎng】，传代达到细胞生长状态良好【hǎo】时，再【zài】进行冻存。具体操作见细【xì】胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。