人结直肠腺癌细胞（HCT-15）

人结直肠腺癌细胞(HCT-15)
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】 RPIVM-1640 培养基（RPMI-1640，GIBCO，90%;胎【tāi】牛血清【qīng】，10%。
2.培养条件：气【qì】相：空【kōng】气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度：37°C，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞【bāo】：将含【hán】有lmL细胞悬液的冻存【cún】管迅速放入37°C水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃【huǎng】解【jiě】冻，移入事先准备好的【de】含有4mL培养基的【de】15ml离心 管中混【hún】合【hé】均匀。在【zài】1000RPM条件下离心4分钟，弃去【qù】上清液，加入lmL培 养基后【hòu】吹【chuī】匀【yún】。然后将所有细胞【bāo】悬【xuán】液移【yí】入【rù】含有5ml培【péi】养【yǎng】基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并【bìng】检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人结直肠腺癌细胞(HCT-15)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的【de】PBS润洗【xǐ】细胞9-22次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消【xiāo】化【huà】9-22分钟，然后【hòu】在显【xiǎn】微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿【ná】回【huí】操作台，轻【qīng】敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的 培养基终止消【xiāo】化。轻轻吹打后吸出【chū】，移入【rù】15ml离心管中【zhōng】，在【zài】1000RPM条件【jiàn】下【xià】离心4分【fèn】钟， 弃去上【shàng】清液，加入lmL培养【yǎng】液后【hòu】吹匀。移入到【dào】事先准【zhǔn】备好【hǎo】的含有5ml培养【yǎng】基的T-25培养瓶中或含【hán】有14ml培【péi】养 基的T-75培养瓶中培养。
 
细胞冻【dòng】存：待细胞【bāo】生长状态【tài】良好时，可进行细胞【bāo】冻存。贴壁细胞【bāo】冻存时，先要消化【huà】处【chù】理并进行细胞计数。消化方法【fǎ】按照细胞传代方法的【de】9-22步【bù】骤进【jìn】行，后的重悬液使用血【xuè】清。悬浮细胞【bāo】直接【jiē】计数后【hòu】离心，用血清重悬浮【fú】，加DMSO 至终浓度为10%。加【jiā】入【rù】DMSO后迅速混匀，按每lml的【de】数量分配到冻存【cún】管中。本公【gōng】司按每个冻【dòng】存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
 
注意事项：
收到细胞后，若发现【xiàn】干冰【bīng】己挥【huī】发干净、冻存【cún】管瓶盖脱落【luò】、破损及细胞有污染，请立【lì】即与【yǔ】我【wǒ】们电联。
所有【yǒu】动【dòng】物细胞均视【shì】为有潜在的【de】生物【wù】危害【hài】性【xìng】，必【bì】须在二级生物【wù】安全台内操作，并请注意防护【hù】，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能【néng】丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：结直肠腺癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人结直肠腺癌细胞(HCT-15)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显【xiǎn】微【wēi】镜下确认细【xì】胞生长状态【tài】，去掉封口膜并将T25瓶置于37°C培养【yǎng】约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞长满（90%以【yǐ】上）请及【jí】时进行【háng】细胞传代，传代培养用【yòng】6ml本公【gōng】司【sī】附【fù】带的*培养基。
5.接【jiē】到细【xì】胞【bāo】次日，请检查细胞是否【fǒu】污【wū】染，若发现污染或【huò】疑似污染，请【qǐng】及时与我们【men】取得电联。
细胞用途：仅供使用。