人结肠癌细胞（HCT 116）

人结肠癌细胞(HCT 116)
细胞介绍：
HCT116是【shì】1979年M.Brattain等从患【huàn】结肠癌的男【nán】性病人中分【fèn】离的三株恶性【xìng】细胞【bāo】之【zhī】 一【yī】。在半固体琼脂糖培养【yǎng】基中形成【chéng】克隆。HCT116在无胸腺的【de】裸鼠有致【zhì】瘤性，形成上皮样的肿瘤。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 McCoy's 5A 培【péi】养基(McCoy's 5A，GIBCO;北美【měi】胎牛血清，10%;双抗1%。
2.培养【yǎng】条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度【dù】：37摄【shè】氏【shì】度，培养箱 湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
1.复苏【sū】细胞：将含有lmL细胞【bāo】悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混【hún】合均匀【yún】。在1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃去上清【qīng】液，补加l-2mL培养基【jī】后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜【yè】（或将细【xì】胞悬【xuán】液加入l〇cm皿中，加入约【yuē】8ml培养【yǎng】基【jī】，培【péi】养过【guò】夜）。第二天【tiān】换液并检查【chá】细【xì】胞密度。
2.细胞传【chuán】代【dài】：如果细【xì】胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人结肠癌细胞(HCT 116)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去培养【yǎng】上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞【bāo】9-22次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养瓶中，置于【yú】37°C培养箱中消化9-22分钟，然后在显微镜下观【guān】察细胞消化情况【kuàng】，若细胞大部【bù】分变【biàn】圆并脱落，迅速拿【ná】回【huí】操【cāo】作台【tái】，轻敲【qiāo】几下培养瓶后加少量培养基终【zhōng】止【zhǐ】消化。按【àn】6-8ml/瓶补【bǔ】加培养基，轻【qīng】轻打匀后【hòu】吸出，在【zài】1000RPM条件下离心【xīn】4分钟，弃【qì】去上清液，补加l-2mL培养液后吹匀。将细胞【bāo】悬【xuán】液【yè】按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基【jī】的【de】新皿中或【huò】者 瓶中。
 
3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细胞冻存时，弃去培养基【jī】后，PBS清洗瓶底9-22次后加入lml胰酶，细胞【bāo】变圆脱落后，加入2ml*培养基【jī】终止消化【huà】，可使用血【xuè】球计数板计【jì】数。1000RPM离【lí】心【xīn】5分【fèn】钟去【qù】掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至终浓【nóng】度为10%。加入DMSO后【hòu】迅速混匀，按每lml的【de】数量分配到冻【dòng】存【cún】管中，注【zhù】意【yì】冻【dòng】存 管做好标识。本公司按每个【gè】冻存管细胞数【shù】目大于1X106个细胞冻存【cún】。将冻存管置于程序降温【wēn】盒中【zhōng】，放入-80度【dù】冰箱，至【zhì】少2个小时【shí】以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿【ná】取【qǔ】。
 
注意事项：
收到【dào】细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻【dòng】存管瓶【píng】盖脱落【luò】、破损【sǔn】及细胞有【yǒu】污染，请立即与我【wǒ】们电联。
所有动物细胞均视为【wéi】有【yǒu】潜【qián】在的【de】生物危害性，必【bì】须在二级生物安【ān】全台内操【cāo】作，并请注【zhù】意防护，所【suǒ】有废液【yè】及【jí】接触过此细胞【bāo】的器皿需要灭菌后方能丢弃。
  
细胞特性：
1)来源：结直肠癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人结肠癌细胞(HCT 116)运输和保存：可选【xuǎn】择干冰运输及发送复苏存活【huó】细胞方式：（1)干冰运【yùn】输，收【shōu】到后【hòu】立即转入液氮冻存或直接复苏【sū】；（2)存【cún】活细胞，收到【dào】后应继续生长【zhǎng】，传【chuán】代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体【tǐ】操【cāo】作见细【xì】胞培养【yǎng】步骤。
细胞用途：仅供使用。