人胚胎肾细胞（HEK-293T）

人胚胎肾细胞(HEK-293T)
细胞介绍：
细胞持续表达【dá】SV40抗【kàng】原，该细【xì】胞【bāo】常用于转染实【shí】验，转染【rǎn】效率较高。（转染一般以【yǐ】 50%密度铺板，待细胞刚【gāng】刚贴【tiē】到皿【mǐn】壁上后【hòu】（一般9-22小时），即可进行转染操作【zuò】)
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备DMEM培养【yǎng】基(DMEM，GIBCO)，90%;胎牛血清，10%。
2. 培养条件【jiàn】：气相：空【kōng】气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄【shè】氏度【dù】，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养【yǎng】基【jī】，10%DMSO,现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞【bāo】：将含【hán】有lmL细【xì】胞【bāo】悬液的冻存管在37°C水浴中【zhōng】迅速摇【yáo】晃【huǎng】解冻【dòng】，加【jiā】入4mL培养基【jī】混合【hé】均匀【yún】。在1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，补加l-2mL培【péi】养【yǎng】基后【hòu】吹匀。然后将所有细胞悬液加入培【péi】养瓶中培养过夜（或将细胞悬【xuán】液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过【guò】夜）。第二天换【huàn】液并检【jiǎn】查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人胚胎肾细胞(HEK-293T)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培养上清【qīng】，用不【bú】含【hán】钙、镁离子的PBS润洗【xǐ】细胞9-22次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱【xiāng】中消【xiāo】化9-22分钟，然后在【zài】显微【wēi】镜下观察细胞消【xiāo】化情【qíng】况，若细胞【bāo】大部分【fèn】变圆并脱落，迅速拿回操作【zuò】台，轻敲【qiāo】几下培养瓶后加少量培【péi】养【yǎng】基终【zhōng】止消【xiāo】化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下【xià】离心4分【fèn】钟，弃去上清液，补加l-2mL培养液后吹【chuī】匀。将【jiāng】细胞悬液【yè】按【àn】1: 2到1: 5的比例分到【dào】新【xīn】的含8ml培养基的新皿中或【huò】者 瓶中。
 
细【xì】胞冻存：待【dài】细胞生长状【zhuàng】态良【liáng】好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存【cún】时，弃去培养基【jī】后加入少量胰【yí】酶，细【xì】胞变圆脱落【luò】后，加入约lml含血【xuè】清【qīng】的培养基后 加入冻存管中，再添【tiān】加1〇%DMSO后进行冻存。
 
注意事项：
收到细胞后【hòu】，若【ruò】发现干冰己挥发【fā】干净、冻存管瓶盖脱落、破损及【jí】细【xì】胞有污染，请立【lì】即与【yǔ】我们电联。
所有动【dòng】物细【xì】胞均视为【wéi】有【yǒu】潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台【tái】内操作，并【bìng】请注意防【fáng】护，所【suǒ】有废液【yè】及【jí】接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：人胚胎肾脏
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装

人胚胎肾细胞(HEK-293T)运输和保存：使用含有胎牛血清的2ml冻【dòng】存管发送存活细【xì】胞【bāo】。收到【dào】细【xì】胞后，可【kě】在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃【qì】去【qù】上清，加入推荐使【shǐ】用的培【péi】养【yǎng】基【jī】后转移至【zhì】l〇cm培养皿或者T25培养【yǎng】瓶中【zhōng】培养，传【chuán】代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体【tǐ】操作见细【xì】胞【bāo】培【péi】养步【bù】骤。
细胞用途：仅供使用。