人胚肺成纤维细胞（HELF）

人胚肺成纤维细胞(HELF)
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培【péi】养基【jī】(RPMI-1640:GIBCO,添加 NaHC03 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g八，丙酮酸钠O.llg八)，90%;胎牛【niú】血清，10%。
2. 培养条件：气相：空【kōng】气，95%;二氧化碳，5%。温度：37°C，培养【yǎng】箱湿度为 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复【fù】苏细胞：将含有lmL细【xì】胞悬液的冻存管迅速【sù】放【fàng】入37°C水浴中（水面【miàn】要低于冻存管盖部）摇晃【huǎng】解【jiě】冻【dòng】，移【yí】入事先准备好【hǎo】的含【hán】有【yǒu】4mL培【péi】养基的【de】15ml离心管中混合【hé】均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入【rù】lmL培 养【yǎng】基后吹匀。然【rán】后将所有细胞【bāo】悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培【péi】养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人胚肺成纤维细胞(HELF)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清【qīng】，用【yòng】不含钙、镁【měi】离子【zǐ】的PBS润洗细胞【bāo】9-22次。力口2m丨【shù】消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养【yǎng】箱中消化【huà】9-22分【fèn】钟，然后在显微镜下【xià】观察【chá】细胞【bāo】消化情况，若细胞【bāo】大部【bù】分【fèn】变【biàn】圆【yuán】并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞【bāo】的 培养基终止消化【huà】。轻轻吹打后吸出【chū】，移入15ml离心【xīn】管中，在【zài】1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】， 弃去上清液，加入lmL培养液后【hòu】吹匀。移入到事【shì】先准备好的含有【yǒu】5ml培养基【jī】的T-25培养瓶中或含有14ml培养【yǎng】 基【jī】的T-75培养瓶中【zhōng】培养。
 
细【xì】胞冻存：待细【xì】胞生长【zhǎng】状态【tài】良好时【shí】，可进行【háng】细胞冻存。贴壁细胞冻存时【shí】，先要消化【huà】处理并进行细胞【bāo】计【jì】数。消化方【fāng】法按照【zhào】细胞传代方法的9-22步【bù】骤【zhòu】进行， 后的【de】重悬液使用血【xuè】清。悬浮细胞直接计数【shù】后【hòu】离心，用血【xuè】清重悬浮，加【jiā】DMSO至终浓度为10%。加入DMSO后迅速混【hún】匀，按每lml的数量【liàng】分配到冻存管中。本公司按【àn】每个【gè】冻存【cún】管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
 
注意事项：
收【shōu】到细胞后【hòu】，若发【fā】现干冰己挥发干净【jìng】、冻【dòng】存管瓶盖脱【tuō】落、破损及细胞有污染，请立【lì】即与我们【men】电联。
所有动物细【xì】胞均视为有潜在的生物危害性【xìng】，必【bì】须在二级生物安【ān】全【quán】台内操作，并【bìng】请注意防护【hù】，所有废【fèi】液及接触过此细【xì】胞的器皿需要【yào】灭菌后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：肺
2)形态：成纤维细胞，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请【qǐng】先在显微镜下确【què】认细胞【bāo】生长状态，去掉【diào】封口膜并将T25瓶置【zhì】于37°C培养约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如【rú】果【guǒ】细【xì】胞长满（90%以上）请及时【shí】进行细【xì】胞传代，传代培养用6ml本公司【sī】附带的【de】*培养基。
5.接到细胞次日，请检查细【xì】胞是否污染，若【ruò】发现污【wū】染【rǎn】或疑似污染【rǎn】，请及时与我们【men】取得电联。
细胞用途：仅供使用。